Faleminderit që vizituat Nature.com. Versioni i shfletuesit që po përdorni ka mbështetje të kufizuar për CSS. Për rezultate më të mira, ne rekomandojmë përdorimin e një shfletuesi më të ri (ose çaktivizimin e modalitetit të përputhshmërisë në Internet Explorer). Ndërkohë, për të siguruar mbështetje të vazhdueshme, ne do ta shfaqim faqen pa stile dhe JavaScript.
Krijimi i modeleve shtazore të ndryshimit modik (MC) është një bazë e rëndësishme për studimin e MC. Pesëdhjetë e katër lepuj të bardhë të Zelandës së Re u ndanë në grupin e operacionit të rremë, grupin e implantimit të muskujve (grupi ME) dhe grupin e implantimit të bërthamës pulposus (grupi NPE). Në grupin NPE, disku intervertebral u ekspozua me anë të qasjes kirurgjikale lumbare anterolaterale dhe një gjilpërë u përdor për të shpuar trupin vertebral L5 pranë pllakës fundore. NP u nxor nga disku intervertebral L1/2 me një shiringë dhe u injektua në të. Duke shpuar një vrimë në kockën subkondrale. Procedurat kirurgjikale dhe metodat e shpimit në grupin e implantimit të muskujve dhe grupin e operacionit të rremë ishin të njëjta me ato në grupin e implantimit të NP. Në grupin ME, një pjesë e muskulit u vendos në vrimë, ndërsa në grupin e operacionit të rremë, asgjë nuk u vendos në vrimë. Pas operacionit, u krye skanimi MRI dhe testimi biologjik molekular. Sinjali në grupin NPE ndryshoi, por nuk kishte ndonjë ndryshim të dukshëm të sinjalit në grupin e operacionit të rremë dhe grupin ME. Vëzhgimi histologjik tregoi se në vendin e implantimit u vu re përhapje jonormale e indeve, dhe shprehja e IL-4, IL-17 dhe IFN-γ u rrit në grupin NPE. Implantimi i NP në kockën subkondrale mund të formojë një model shtazor të MC.
Ndryshimet Modike (MC) janë lezione të pllakave fundore vertebrale dhe palcës së kockave ngjitur të dukshme në imazhe me rezonancë magnetike (MRI). Ato janë mjaft të zakonshme tek individët me simptoma të shoqëruara1. Shumë studime kanë theksuar rëndësinë e MC për shkak të lidhjes së saj me dhimbjen e shpinës së poshtme (LBP)2,3. de Roos et al.4 dhe Modic et al.5 përshkruan në mënyrë të pavarur për herë të parë tre lloje të ndryshme të anomalive të sinjalit subkondral në palcën e kockave vertebrale. Ndryshimet Modike të tipit I janë hipointense në sekuencat e ponderuara T1 (T1W) dhe hiperintense në sekuencat e ponderuara T2 (T2W). Ky lezion zbulon pllaka fundore të çarjeve dhe ind granulacioni vaskular ngjitur në palcën e kockave. Ndryshimet Modike të tipit II tregojnë sinjal të lartë në të dy sekuencat T1W dhe T2W. Në këtë lloj lezioni, mund të gjendet shkatërrimi i pllakave fundore, si dhe zëvendësimi histologjik yndyror i palcës së kockave ngjitur. Ndryshimet Modike të tipit III tregojnë sinjal të ulët në sekuencat T1W dhe T2W. Janë vërejtur lezione sklerotike që korrespondojnë me pllakat fundore6. MC konsiderohet një sëmundje patologjike e shtyllës kurrizore dhe është e lidhur ngushtë me shumë sëmundje degjenerative të shtyllës kurrizore7,8,9.
Duke marrë parasysh të dhënat në dispozicion, disa studime kanë ofruar njohuri të hollësishme mbi etiologjinë dhe mekanizmat patologjikë të MC-së. Albert et al. sugjeruan që MC mund të shkaktohet nga hernia diskale8. Hu et al. ia atribuan MC-në degjenerimit të rëndë të diskut10. Kroc propozoi konceptin e "këputjes së brendshme të diskut", i cili pohon se trauma e përsëritur e diskut mund të çojë në mikroçarje në pllakën fundore. Pas formimit të çarjes, shkatërrimi i pllakës fundore nga bërthama pulposus (NP) mund të shkaktojë një përgjigje autoimune, e cila çon më tej në zhvillimin e MC11. Ma et al. ndanë një pikëpamje të ngjashme dhe raportuan se autoimuniteti i shkaktuar nga NP luan një rol kyç në patogjenezën e MC12.
Qelizat e sistemit imunitar, veçanërisht limfocitet T ndihmëse CD4+, luajnë një rol kritik në patogjenezën e autoimunitetit13. Nëngrupi Th17 i zbuluar së fundmi prodhon citokinën proinflamatore IL-17, nxit shprehjen e kemokinës dhe stimulon qelizat T në organet e dëmtuara për të prodhuar IFN-γ14. Qelizat Th2 gjithashtu luajnë një rol unik në patogjenezën e përgjigjeve imune. Shprehja e IL-4 si një qelizë përfaqësuese Th2 mund të çojë në pasoja të rënda imunopatologjike15.
Edhe pse janë kryer shumë studime klinike mbi MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, ende mungon një numër i modeleve të përshtatshme eksperimentale në kafshë që mund të imitojnë procesin MC që ndodh shpesh tek njerëzit dhe që mund të përdoren për të hetuar etiologjinë ose trajtime të reja siç është terapia e synuar. Deri më sot, vetëm disa modele shtazore të MC janë raportuar për të studiuar mekanizmat patologjikë themelorë.
Bazuar në teorinë autoimune të propozuar nga Albert dhe Ma, ky studim krijoi një model të thjeshtë dhe të riprodhueshëm të MC të lepurit duke autotransplantuar NP pranë pllakës fundore të shpuar të vertebrës. Objektiva të tjerë janë vëzhgimi i karakteristikave histologjike të modeleve shtazore dhe vlerësimi i mekanizmave specifikë të NP në zhvillimin e MC. Për këtë qëllim, ne përdorim teknika të tilla si biologjia molekulare, MRI dhe studime histologjike për të studiuar përparimin e MC.
Dy lepuj ngordhën nga gjakderdhja gjatë operacionit dhe katër lepuj ngordhën gjatë anestezisë gjatë rezonancës magnetike. 48 lepujt e mbetur mbijetuan dhe nuk treguan shenja sjelljeje ose neurologjike pas operacionit.
Rezonanca magnetike tregon se intensiteti i sinjalit të indit të ngulitur në vrima të ndryshme është i ndryshëm. Intensiteti i sinjalit të trupit vertebral L5 në grupin NPE ndryshoi gradualisht në 12, 16 dhe 20 javë pas futjes (sekuenca T1W tregoi sinjal të ulët, dhe sekuenca T2W tregoi sinjal të përzier plus sinjal të ulët) (Fig. 1C), ndërsa pamjet e rezonancës magnetike të dy grupeve të tjera të pjesëve të ngulitura mbetën relativisht të qëndrueshme gjatë së njëjtës periudhë (Fig. 1A, B).
(A) Rezonanca magnetike reprezentative sekuenciale të shtyllës kurrizore lumbare të lepurit në 3 pika kohore. Nuk u gjetën anomali të sinjalit në imazhet e grupit të operacionit të rremë. (B) Karakteristikat e sinjalit të trupit vertebral në grupin ME janë të ngjashme me ato në grupin e operacionit të rremë, dhe nuk vërehet asnjë ndryshim domethënës i sinjalit në vendin e ngulitjes me kalimin e kohës. (C) Në grupin NPE, sinjali i ulët është qartë i dukshëm në sekuencën T1W, dhe sinjali i përzier dhe sinjali i ulët janë qartë të dukshëm në sekuencën T2W. Nga periudha 12-javore deri në periudhën 20-javore, sinjalet sporadike të larta që rrethojnë sinjalet e ulëta në sekuencën T2W ulen.
Hiperplazia e dukshme e kockave mund të shihet në vendin e implantimit të trupit vertebral në grupin NPE, dhe hiperplazia e kockave ndodh më shpejt nga java e 12-të deri në të 20-tën (Fig. 2C) krahasuar me grupin NPE, nuk vërehet ndonjë ndryshim domethënës në trupat vertebrorë të modeluar; grupi Sham dhe grupi ME (Fig. 2C) (2A,B).
(A) Sipërfaqja e trupit vertebral në pjesën e implantuar është shumë e lëmuar, vrima shërohet mirë dhe nuk ka hiperplazi në trupin vertebral. (B) Forma e vendit të implantuar në grupin ME është e ngjashme me atë në grupin e operacionit të rremë dhe nuk ka ndonjë ndryshim të dukshëm në pamjen e vendit të implantuar me kalimin e kohës. (C) Hiperplazia e kockave ndodhi në vendin e implantuar në grupin NPE. Hiperplazia e kockave u rrit me shpejtësi dhe madje u shtri përmes diskut ndërvertebral në trupin vertebral kontralateral.
Analiza histologjike ofron informacion më të detajuar në lidhje me formimin e kockave. Figura 3 tregon fotografitë e seksioneve postoperative të ngjyrosura me H&E. Në grupin e operacionit të rremë, kondrocitet ishin të rregulluara mirë dhe nuk u zbulua asnjë përhapje qelizore (Fig. 3A). Situata në grupin ME ishte e ngjashme me atë në grupin e operacionit të rremë (Fig. 3B). Megjithatë, në grupin NPE, një numër i madh kondrocitesh dhe përhapje e qelizave të ngjashme me NP u vunë re në vendin e implantimit (Fig. 3C);
(A) Trabekulat mund të shihen pranë pllakës fundore, kondrocitet janë të rregulluara mirë me madhësi dhe formë qelizore uniforme dhe pa përhapje (40 herë). (B) Gjendja e vendit të implantimit në grupin ME është e ngjashme me atë të grupit të rremë. Trabekulat dhe kondrocitet mund të shihen, por nuk ka përhapje të dukshme në vendin e implantimit (40 herë). (B) Mund të shihet se kondrocitet dhe qelizat e ngjashme me NP përhapen ndjeshëm, dhe forma dhe madhësia e kondrociteve janë të pabarabarta (40 herë).
Shprehja e ARNi-së së interleukinës 4 (IL-4), ARNi-së së interleukinës 17 (IL-17) dhe ARNi-së së interferonit γ (IFN-γ) u vu re në të dy grupet NPE dhe ME. Kur u krahasuan nivelet e shprehjes së gjeneve të synuara, shprehjet e gjeneve të IL-4, IL-17 dhe IFN-γ u rritën ndjeshëm në grupin NPE krahasuar me ato të grupit ME dhe grupit të operacionit të rremë (Fig. 4) (P < 0.05). Krahasuar me grupin e operacionit të rremë, nivelet e shprehjes së IL-4, IL-17 dhe IFN-γ në grupin ME u rritën vetëm pak dhe nuk arritën ndryshim statistikor (P > 0.05).
Shprehja e ARNi-së së IL-4, IL-17 dhe IFN-γ në grupin NPE tregoi një trend dukshëm më të lartë sesa ato në grupin e operacionit të rremë dhe grupin ME (P < 0.05).
Në të kundërt, nivelet e shprehjes në grupin ME nuk treguan ndonjë ndryshim domethënës (P> 0.05).
Analiza Western blot u krye duke përdorur antitrupa të disponueshëm komercialisht kundër IL-4 dhe IL-17 për të konfirmuar modelin e ndryshuar të shprehjes së mRNA-së. Siç tregohet në Figurat 5A,B, krahasuar me grupin ME dhe grupin e operacionit të rremë, nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 në grupin NPE u rritën ndjeshëm (P < 0.05). Krahasuar me grupin e operacionit të rremë, nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 në grupin ME gjithashtu nuk arritën ndryshime statistikisht të rëndësishme (P> 0.05).
(A) Nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 në grupin NPE ishin dukshëm më të larta se ato në grupin ME dhe grupin placebo (P < 0.05). (B) Histograma Western blot.
Për shkak të numrit të kufizuar të mostrave njerëzore të marra gjatë operacionit, studimet e qarta dhe të detajuara mbi patogjenezën e karcinomës menstruale (MC) janë disi të vështira. Ne u përpoqëm të krijonim një model shtazor të MC për të studiuar mekanizmat e tij të mundshëm patologjikë. Në të njëjtën kohë, vlerësimi radiologjik, vlerësimi histologjik dhe vlerësimi molekular biologjik u përdorën për të ndjekur rrjedhën e MC të induktuar nga autotransplanti NP. Si rezultat, modeli i implantimit të NP rezultoi në një ndryshim gradual të intensitetit të sinjalit nga pikat kohore 12-javore në 20-javore (sinjal i ulët i përzier në sekuencat T1W dhe sinjal i ulët në sekuencat T2W), duke treguar ndryshime në inde, dhe vlerësimet histologjike dhe molekulare biologjike konfirmuan rezultatet e studimit radiologjik.
Rezultatet e këtij eksperimenti tregojnë se ndryshime vizuale dhe histologjike ndodhën në vendin e shkeljes së trupit vertebral në grupin NPE. Në të njëjtën kohë, u vu re shprehja e gjeneve IL-4, IL-17 dhe IFN-γ, si dhe IL-4, IL-17 dhe IFN-γ, duke treguar se shkelja e indit autolog të bërthamës pulposus në trupin vertebral mund të shkaktojë një sërë ndryshimesh sinjalizuese dhe morfologjike. Është e lehtë të zbulohet se karakteristikat e sinjalit të trupave vertebrorë të modelit shtazor (sinjal i ulët në sekuencën T1W, sinjal i përzier dhe sinjal i ulët në sekuencën T2W) janë shumë të ngjashme me ato të qelizave vertebrale njerëzore, dhe karakteristikat e MRI-së gjithashtu konfirmojnë vëzhgimet e histologjisë dhe anatomisë së përgjithshme, domethënë, ndryshimet në qelizat e trupit vertebral janë progresive. Megjithëse përgjigja inflamatore e shkaktuar nga trauma akute mund të shfaqet menjëherë pas shpimit, rezultatet e MRI-së treguan se ndryshimet progresive në rritje të sinjalit u shfaqën 12 javë pas shpimit dhe vazhduan deri në 20 javë pa ndonjë shenjë të rikuperimit ose përmbysjes së ndryshimeve të MRI-së. Këto rezultate sugjerojnë që NP vertebrale autologe është një metodë e besueshme për krijimin e MA progresive te lepujt.
Ky model shpimi kërkon aftësi, kohë dhe përpjekje kirurgjikale të mjaftueshme. Në eksperimentet paraprake, diseksioni ose stimulimi i tepërt i strukturave ligamentoze paravertebrale mund të rezultojë në formimin e osteofiteve vertebrale. Duhet të tregohet kujdes që të mos dëmtohen ose irritohen disqet ngjitur. Meqenëse thellësia e depërtimit duhet të kontrollohet për të marrë rezultate të qëndrueshme dhe të riprodhueshme, ne bëmë manualisht një tapë duke prerë mbështjellësin e një gjilpëre me gjatësi 3 mm. Përdorimi i këtij tape siguron thellësi uniforme shpimi në trupin vertebral. Në eksperimentet paraprake, tre kirurgë ortopedë të përfshirë në operacion zbuluan se gjilpërat 16-gauge ishin më të lehta për t'u përdorur sesa gjilpërat 18-gauge ose metoda të tjera. Për të shmangur gjakderdhjen e tepërt gjatë shpimit, mbajtja e gjilpërës pa lëvizur për një kohë do të sigurojë një vrimë futjeje më të përshtatshme, duke sugjeruar që një shkallë e caktuar e MC mund të kontrollohet në këtë mënyrë.
Edhe pse shumë studime kanë synuar MC-në, dihet pak rreth etiologjisë dhe patogjenezës së MC25,26,27. Bazuar në studimet tona të mëparshme, zbuluam se autoimuniteti luan një rol kyç në shfaqjen dhe zhvillimin e MC12. Ky studim shqyrtoi shprehjen sasiore të IL-4, IL-17 dhe IFN-γ, të cilat janë rrugët kryesore të diferencimit të qelizave CD4+ pas stimulimit të antigjenit. Në studimin tonë, krahasuar me grupin negativ, grupi NPE kishte shprehje më të lartë të IL-4, IL-17 dhe IFN-γ, dhe nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 ishin gjithashtu më të larta.
Klinikisht, shprehja e ARNi-së së IL-17 është rritur në qelizat NP nga pacientët me hernie diskale28. Nivele të rritura të shprehjes së IL-4 dhe IFN-γ u gjetën gjithashtu në një model akut jo-kompresiv të hernies diskale krahasuar me kontrollet e shëndetshme29. IL-17 luan një rol kyç në inflamacion, dëmtim të indeve në sëmundjet autoimune30 dhe rrit përgjigjen imune ndaj IFN-γ31. Dëmtimi i rritur i indeve i ndërmjetësuar nga IL-17 është raportuar në minjtë MRL/lpr32 dhe minjtë e ndjeshëm ndaj autoimunitetit33. IL-4 mund të pengojë shprehjen e citokinave proinflamatore (si IL-1β dhe TNFα) dhe aktivizimin e makrofagëve34. Është raportuar se shprehja e ARNi-së së IL-4 ishte e ndryshme në grupin NPE krahasuar me IL-17 dhe IFN-γ në të njëjtën pikë kohore; Shprehja e ARNi-së së IFN-γ në grupin NPE ishte dukshëm më e lartë se ajo në grupet e tjera. Prandaj, prodhimi i IFN-γ mund të jetë një ndërmjetës i përgjigjes inflamatore të shkaktuar nga ndërfutja e NP. Studimet kanë treguar se IFN-γ prodhohet nga lloje të shumta qelizash, duke përfshirë qelizat T ndihmëse të tipit 1 të aktivizuara, qelizat vrasëse natyrale dhe makrofagët35,36, dhe është një citokinë kryesore pro-inflamatore që nxit përgjigjet imune37.
Ky studim sugjeron që përgjigja autoimune mund të jetë e përfshirë në shfaqjen dhe zhvillimin e MC. Luoma et al. zbuluan se karakteristikat e sinjalit të MC dhe NP të spikatur janë të ngjashme në MRI, dhe të dyja tregojnë sinjal të lartë në sekuencën T2W38. Disa citokina janë konfirmuar të jenë të lidhura ngushtë me shfaqjen e MC, siç është IL-139. Ma et al. sugjeruan që zgjatja lart ose poshtë e NP mund të ketë një ndikim të madh në shfaqjen dhe zhvillimin e MC12. Bobechko40 dhe Herzbein et al.41 raportuan se NP është një ind imunotolerant që nuk mund të hyjë në qarkullimin vaskular që nga lindja. Zgjatjet e NP fusin trupa të huaj në furnizimin me gjak, duke ndërmjetësuar kështu reaksione autoimune lokale42. Reaksionet autoimune mund të shkaktojnë një numër të madh faktorësh imunitarë, dhe kur këta faktorë ekspozohen vazhdimisht ndaj indeve, ato mund të shkaktojnë ndryshime në sinjalizim43. Në këtë studim, mbishprehja e IL-4, IL-17 dhe IFN-γ janë faktorë tipikë imunitarë, duke vërtetuar më tej marrëdhënien e ngushtë midis NP dhe MC-ve44. Ky model shtazor imiton mirë depërtimin e NP dhe hyrjen në pllakën fundore. Ky proces zbuloi më tej ndikimin e autoimunitetit në MC.
Siç pritej, ky model shtazor na ofron një platformë të mundshme për të studiuar MC-në. Megjithatë, ky model ka ende disa kufizime: së pari, gjatë fazës së vëzhgimit të kafshëve, disa lepuj në fazë të ndërmjetme duhet të eutanizohen për testime histologjike dhe të biologjisë molekulare, kështu që disa kafshë "dalin jashtë përdorimit" me kalimin e kohës. Së dyti, megjithëse në këtë studim janë vendosur tre pika kohore, për fat të keq, ne modeluam vetëm një lloj MC (ndryshimi i tipit I të Modic-ut), kështu që nuk mjafton për të përfaqësuar procesin e zhvillimit të sëmundjes njerëzore, dhe duhet të vendosen më shumë pika kohore për të vëzhguar më mirë të gjitha ndryshimet e sinjalit. Së treti, ndryshimet në strukturën e indeve mund të tregohen qartë nga ngjyrosja histologjike, por disa teknika të specializuara mund të zbulojnë më mirë ndryshimet mikrostrukturore në këtë model. Për shembull, mikroskopia e dritës së polarizuar u përdor për të analizuar formimin e fibrokartilazhit në disqet ndërvertebrale të lepurit45. Efektet afatgjata të NP në MC dhe pllakën fundore kërkojnë studime të mëtejshme.
Pesëdhjetë e katër lepuj të bardhë meshkuj të Zelandës së Re (me peshë rreth 2.5-3 kg, mosha 3-3.5 muaj) u ndanë rastësisht në grupin e operacionit të rremë, grupin e implantimit të muskujve (grupi ME) dhe grupin e implantimit të rrënjës nervore (grupi NPE). Të gjitha procedurat eksperimentale u miratuan nga Komiteti i Etikës i Spitalit Tianjin dhe metodat eksperimentale u kryen në përputhje të rreptë me udhëzimet e miratuara.
Disa përmirësime janë bërë në teknikën kirurgjikale të S. Sobajima 46. Çdo lepur u vendos në një pozicion shtrirë anash dhe sipërfaqja e përparme e pesë disqeve ndërvertebrore lumbare (IVD) të njëpasnjëshme u ekspozua duke përdorur një qasje retroperitoneale posterolaterale. Çdo lepuri iu dha anestezi e përgjithshme (20% uretan, 5 ml/kg nëpërmjet venës së veshit). Një prerje gjatësore e lëkurës u bë nga buza e poshtme e brinjëve deri në buzën e legenit, 2 cm ventrale deri te muskujt paravertebralë. Shpina anterolaterale e djathtë nga L1 në L6 u ekspozua me anë të diseksionit të mprehtë dhe të topitur të indit nënlëkuror sipërfaqësor, indit retroperitoneal dhe muskujve (Fig. 6A). Niveli i diskut u përcaktua duke përdorur buzën e legenit si një pikë referimi anatomike për nivelin e diskut L5-L6. Përdorni një gjilpërë shpimi 16-gauge për të shpuar një vrimë pranë pllakës fundore të vertebrës L5 në një thellësi prej 3 mm (Fig. 6B). Përdorni një shiringë 5 ml për të aspiruar bërthamën pulposus autologe në diskun ndërvertebral L1-L2 (Fig. 6C). Hiqni bërthamën pulposus ose muskulin sipas kërkesave të secilit grup. Pasi të thellohet vrima e shpuar, vendosen qepje të absorbueshme në fascën e thellë, fascën sipërfaqësore dhe lëkurën, duke pasur kujdes që të mos dëmtohet indi periosteal i trupit vertebral gjatë operacionit.
(A) Disku L5–L6 ekspozohet nëpërmjet një qasjeje retroperitoneale posterolaterale. (B) Përdorni një gjilpërë 16-gauge për të shpuar një vrimë pranë pllakës fundore L5. (C) Mblidhen MF autologe.
Anestezia e përgjithshme u administrua me 20% uretan (5 ml/kg) të administruar nëpërmjet venës së veshit, dhe radiografitë e shtyllës kurrizore lumbare u përsëritën në javën 12, 16 dhe 20 pas operacionit.
Lepujt u sakrifikuan me injeksion intramuskular të ketaminës (25.0 mg/kg) dhe pentobarbital natriumi intravenoz (1.2 g/kg) në 12, 16 dhe 20 javë pas operacionit. E gjithë shtylla kurrizore u hoq për analizë histologjike dhe u krye analiza reale. Transkriptimi sasior i kundërt (RT-qPCR) dhe Western blotting u përdorën për të zbuluar ndryshimet në faktorët imunitarë.
Ekzaminimet me rezonancë magnetike (MRI) u kryen te lepujt duke përdorur një magnet klinik 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) të pajisur me një marrës spirale ortogonale të gjymtyrëve. Lepujt u anestezuan me 20% uretan (5 mL/kg) nëpërmjet venës së veshit dhe më pas u vendosën në shpinë brenda magnetit me rajonin lumbar të përqendruar në një spirale sipërfaqësore rrethore me diametër 5 inç (GE Medical Systems). Imazhet e lokalizuesit koronal të ponderuar T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) u morën për të përcaktuar vendndodhjen e diskut lumbar nga L3–L4 në L5–L6. Feta të ponderuara T2 në planin sagittal u morën me cilësimet e mëposhtme: sekuencë e shpejtë spin-echo me një kohë përsëritjeje (TR) prej 2200 ms dhe një kohë jehone (TE) prej 70 ms, matricë; fushë vizuale prej 260 dhe tetë stimuj; Trashësia e prerjes ishte 2 mm, boshllëku ishte 0.2 mm.
Pasi u bë fotografia e fundit dhe u vra lepuri i fundit, disqet e rreme, të ngulitura në muskuj dhe NP u hoqën për ekzaminim histologjik. Indet u fiksuan në formalinë neutrale të tamponuar 10% për 1 javë, u dekalcifikuan me acid etilendiaminetetraacetik dhe u prenë me parafinë. Blloqet e indeve u ngulitën në parafinë dhe u prenë në seksione sagitale (5 μm të trasha) duke përdorur një mikrotom. Seksionet u ngjyrosën me hematoksilinë dhe eozinë (H&E).
Pas mbledhjes së disqeve ndërvertebrore nga lepujt në secilin grup, ARN-ja totale u nxor duke përdorur një kolonë UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kinë) sipas udhëzimeve të prodhuesit dhe një sistemi transkriptimi të kundërt ImProm II (Promega Inc., Madison, WI, SHBA). U krye transkriptimi i kundërt.
RT-qPCR u krye duke përdorur një Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., SHBA) dhe SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SHBA) sipas udhëzimeve të prodhuesit. Vëllimi i reaksionit PCR ishte 20 μl dhe përmbante 1.5 μl ADNc të holluar dhe 0.2 μM të secilit prajmer. Prajmerët u projektuan nga OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) dhe u prodhuan nga Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kinë) (Tabela 1). U përdorën kushtet e mëposhtme të ciklit termik: hapi fillestar i aktivizimit të polimerazës në 94°C për 2 minuta, pastaj 40 cikle nga 15 s secili në 94°C për denatyrimin e shabllonit, kalitjen për 1 minutë në 60°C, zgjatjen dhe fluoreshencën. Matjet u kryen për 1 minutë në 72°C. Të gjitha mostrat u amplifikuan tre herë dhe vlera mesatare u përdor për analizën RT-qPCR. Të dhënat e amplifikimit u analizuan duke përdorur FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, SHBA). Shprehja e gjenit IL-4, IL-17 dhe IFN-γ u normalizua në kontrollin endogjen (ACTB). Nivelet relative të shprehjes së ARNi-së së synuar u llogaritën duke përdorur metodën 2-ΔΔCT.
Proteina totale u nxor nga indet duke përdorur një homogjenizues indesh në tampon lize RIPA (që përmbante një koktej frenuesish të proteazës dhe fosfatazës) dhe më pas u centrifugua në 13,000 rpm për 20 minuta në 4°C për të hequr mbeturinat e indeve. Pesëdhjetë mikrogramë proteinë u ngarkuan për korsi, u ndanë me 10% SDS-PAGE dhe më pas u transferuan në një membranë PVDF. Bllokimi u krye në qumësht të thatë pa yndyrë 5% në tretësirë fiziologjike të tamponuar me Tris (TBS) që përmbante 0.1% Tween 20 për 1 orë në temperaturën e dhomës. Membrana u inkubua me antitrup primar anti-dekorin të lepurit (i holluar 1:200; Boster, Wuhan, Kinë) (i holluar 1:200; Bioss, Pekin, Kinë) gjatë natës në 4°C dhe reagoi në ditët e dyta; me antitrup sekondar (imunoglobulinë G anti-lepuri dhie në hollim 1:40,000) të kombinuar me peroksidazë rrikë të egër (Boster, Wuhan, Kinë) për 1 orë në temperaturë ambienti. Sinjalet Western blot u zbuluan nga kemilumineshenca e shtuar në membranën kemilumineshente pas rrezatimit me rreze X. Për analizën densitometrike, blotet u skanuan dhe u përcaktuan sasiore duke përdorur programin BandScan dhe rezultatet u shprehën si raport i imunoreaktivitetit të gjenit të synuar me imunoreaktivitetin e tubulinës.
Llogaritjet statistikore u kryen duke përdorur paketën softuerike SPSS16.0 (SPSS, SHBA). Të dhënat e mbledhura gjatë studimit u shprehën si mesatare ± devijim standard (mesatarja ± SD) dhe u analizuan duke përdorur analizën e variancës me matje të përsëritura njëkahëshe (ANOVA) për të përcaktuar ndryshimet midis dy grupeve. P < 0.05 u konsiderua statistikisht e rëndësishme.
Kështu, krijimi i një modeli shtazor të MC duke implantuar NP autologe në trupin vertebral dhe duke kryer vëzhgim makroanatomik, analizë MRI, vlerësim histologjik dhe analizë molekulare biologjike mund të bëhet një mjet i rëndësishëm për vlerësimin dhe kuptimin e mekanizmave të MC-së njerëzore dhe zhvillimin e ndërhyrjeve të reja terapeutike.
Si ta citoni këtë artikull: Han, C. et al. Një model shtazor i ndryshimeve Modic u krijua duke implantuar bërthamën pulposus autologe në kockën subkondrale të shtyllës kurrizore lumbare. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., dhe Boos, N. Imazheria me rezonancë magnetike e shtyllës kurrizore lumbare: prevalenca e hernies dhe mbajtjes së diskut, kompresimi i rrënjës nervore, anomalitë e pllakave fundore dhe osteoartriti i nyjeve të fasetave te vullnetarët asimptomatikë. shkalla. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, dhe Leboeuf-Eed, K. Ndryshimet e Modic dhe lidhja e tyre me gjetjet klinike. Revista Evropiane e Shtyllës Kurrizore: botim zyrtar i Shoqatës Evropiane të Shtyllës Kurrizore, Shoqatës Evropiane të Deformimit të Shtyllës Kurrizore dhe Shoqatës Evropiane për Kërkime të Shtyllës Kurrizore Cervikale 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Ndryshimet Modic në pllakat fundore të vertebrave lumbare: prevalenca dhe lidhja me dhimbjen e shpinës së poshtme dhe shiatikun tek punëtorët meshkuj të moshës së mesme. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., dhe Dalinka, M. MRI e ndryshimeve të palcës së kockave pranë pllakës fundore në sëmundjen degjenerative të shtyllës kurrizore lumbare. AJR. Revista Amerikane e Radiologjisë 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, dhe Carter, JR Sëmundja degjenerative e diskut: vlerësimi i ndryshimeve të palcës vertebrale me MRI. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, dhe Carter, JR Imazheria e sëmundjes degjenerative të diskut. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Parashikuesit e pllakës fundore neovertebrale (Modic) sinjalizojnë ndryshime në popullatën e përgjithshme. Revista Evropiane e Shtyllës Kurrizore: Publikimi Zyrtar i Shoqërisë Evropiane të Shtyllës Kurrizore, Shoqërisë Evropiane të Deformimit Kurrizor dhe Shoqërisë Evropiane për Kërkime të Shtyllës Kurrizore Cervikale, Divizioni 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB dhe Mannisch, K. Ndryshimet e Modic pas hernies diskale lumbare. Revista Evropiane e Shpinës: Publikimi Zyrtar i Shoqatës Evropiane të Shpinës, Shoqatës Evropiane të Deformimit të Shpinës dhe Shoqatës Evropiane për Kërkime të Shpinës Cervikale 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., dhe Kaapa, E. Ndryshimet e tipit I të Modic mund të parashikojnë degjenerim deformues të diskut që përparon me shpejtësi: një studim prospektiv 1-vjeçar. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ dhe Fan, SW Ndryshimet e Modic: shkaqet e mundshme dhe kontributi në degjenerimin e diskut lumbar. Hipoteza Mjekësore 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Këputje e brendshme e diskut. Probleme me prolapsin e diskut gjatë 50 viteve. Shtylla kurrizore (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Koha e postimit: 13 dhjetor 2024