Faleminderit për vizitën e natyrës.com. Versioni i shfletuesit që po përdorni ka mbështetje të kufizuar CSS. Për rezultate më të mira, ne ju rekomandojmë të përdorni një shfletues më të ri (ose paaftësimin e mënyrës së pajtueshmërisë në Internet Explorer). Ndërkohë, për të siguruar mbështetje të vazhdueshme, ne do të shfaqim sitin pa stile dhe JavaScript.
Themelimi i modeleve të kafshëve të ndryshimit modik (MC) është një bazë e rëndësishme për studimin e MC. Pesëdhjetë e katër lepuj të bardhë në Zelandën e Re u ndanë në grupin e operacionit të turpit, grupin e implantimit të muskujve (ME Group) dhe Grupin e Implantimit të Pulposus Nucleus (NPE Group). Në grupin NPE, disku intervertebral u ekspozua nga qasja kirurgjikale anterolaterale lumbare dhe një gjilpërë u përdor për të shpuar trupin vertebral L5 afër pllakës fundore. NP u ekstraktua nga disku intervertebral L1/2 nga një shiringë dhe u injektua në të. Duke shpuar një vrimë në kockën nënkondrale. Procedurat kirurgjikale dhe metodat e shpimit në grupin e implantimit të muskujve dhe grupi i operacionit të turpshëm ishin të njëjta me ato në grupin e implantimit të NP. Në grupin ME, një copë muskul u vendos në vrimë, ndërsa në grupin e operacionit të turpshëm, asgjë nuk u vendos në vrimë. Pas operacionit, u kryen skanimi i MRI dhe testimi biologjik molekular. Sinjali në grupin NPE ndryshoi, por nuk pati asnjë ndryshim të dukshëm të sinjalit në grupin e operacionit të turpit dhe grupin ME. Vëzhgimi histologjik tregoi se përhapja jonormale e indeve është vërejtur në vendin e implantimit, dhe shprehja e IL-4, IL-17 dhe IFN-γ u rrit në grupin NPE. Implantimi i NP në kockën nënkondrale mund të formojë një model kafshësh të MC.
Ndryshimet modike (MC) janë lezione të pllakave vertebrale dhe palcës së kockave ngjitur të dukshme në imazhin e rezonancës magnetike (MRI). Ato janë mjaft të zakonshme tek individët me simptoma të shoqëruara1. Shumë studime kanë theksuar rëndësinë e MC për shkak të shoqërimit të saj me dhimbje të ulët të shpinës (LBP) 2,3. De Roos et al.4 dhe Modic et al.5 në mënyrë të pavarur përshkruan tre lloje të ndryshme të anomalive të sinjalit nënkondral në palcën e eshtrave vertebral. Ndryshimet modike të tipit I janë hipointene në sekuencat me peshë T1 (T1W) dhe hiperintene në sekuencat me peshë T2 (T2W). Kjo lezion zbulon pllaka fissure dhe ind ngjitur me granulim vaskular në palcën e eshtrave. Ndryshimet modike të tipit II tregojnë sinjal të lartë në të dy sekuencat T1W dhe T2W. Në këtë lloj të lezionit, mund të gjendet shkatërrimi i pllakave, si dhe zëvendësimi yndyror histologjik i palcës së kockave ngjitur. Ndryshimet modike të tipit III tregojnë sinjal të ulët në sekuencat T1W dhe T2W. Lezionet sklerotike që korrespondojnë me pllakat e fundit janë vërejtur6. MC konsiderohet një sëmundje patologjike e shtyllës kurrizore dhe shoqërohet ngushtë me shumë sëmundje degjenerative të shtyllës kurrizore7,8,9.
Duke marrë parasysh të dhënat e disponueshme, disa studime kanë dhënë njohuri të hollësishme në etiologjinë dhe mekanizmat patologjikë të MC. Albert et al. sugjeroi që MC mund të shkaktohet nga Herniation Disc8. Hu et al. atribuohet MC në degjenerimin e diskut të rëndë10. KROC propozoi konceptin e "këputjes së diskut të brendshëm", i cili thotë se trauma e përsëritur e diskut mund të çojë në mikroteare në fund. Pas formimit të çarjes, shkatërrimi i pllakave nga Pulposus Nucleus (NP) mund të shkaktojë një përgjigje autoimune, e cila çon më tej në zhvillimin e MC11. Ma et al. ndau një pamje të ngjashme dhe raportoi se autoimuniteti i shkaktuar nga NP luan një rol kryesor në patogjenezën e MC12.
Qelizat e sistemit imunitar, veçanërisht limfocitet ndihmëse CD4+ T, luajnë një rol kritik në patogjenezën e autoimmunity13. Nënshtresa e zbuluar së fundmi Th17 prodhon citokinë proinflamatore IL-17, promovon shprehjen e kemokinës dhe stimulon qelizat T në organet e dëmtuara për të prodhuar IFN-γ14. Qelizat Th2 gjithashtu luajnë një rol unik në patogjenezën e përgjigjeve imune. Shprehja e IL-4 si një qelizë përfaqësuese Th2 mund të çojë në pasoja të rënda imunopatologjike15.
Megjithëse shumë studime klinike janë kryer në MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, ka ende mungesë të modeleve të përshtatshme eksperimentale të kafshëve që mund të imitojnë procesin MC që ndodh shpesh te njerëzit dhe mund të jetë Përdoret për të hetuar etiologjinë ose trajtimet e reja siç është terapia e synuar. Deri më tani, vetëm disa modele kafshësh të MC janë raportuar të studiojnë mekanizmat themelorë patologjikë.
Bazuar në teorinë autoimune të propozuar nga Albert dhe MA, ky studim vendosi një model të thjeshtë dhe të riprodhueshëm të lepurit MC duke autotransplantuar NP pranë pllakës fundore vertebrale të shpuar. Objektivat e tjerë janë të vëzhgojnë karakteristikat histologjike të modeleve të kafshëve dhe të vlerësojnë mekanizmat specifikë të NP në zhvillimin e MC. Për këtë qëllim, ne përdorim teknika të tilla si biologjia molekulare, MRI dhe studimet histologjike për të studiuar përparimin e MC.
Dy lepuj vdiqën nga gjakderdhja gjatë operacionit, dhe katër lepuj vdiqën gjatë anestezisë gjatë MRI. 48 lepujt e mbetur mbijetuan dhe nuk treguan shenja të sjelljes ose neurologjike pas operacionit.
MRI tregon se intensiteti i sinjalit të indit të ngulitur në vrima të ndryshme është i ndryshëm. Intensiteti i sinjalit të trupit vertebral L5 në grupin NPE ndryshoi gradualisht në 12, 16 dhe 20 javë pas futjes (sekuenca T1W tregoi sinjal të ulët, dhe sekuenca T2W tregoi sinjal të përzier plus sinjal të ulët) (Fig. 1C), ndërsa paraqitjet MRI Nga dy grupet e tjera të pjesëve të ngulitura mbetën relativisht të qëndrueshme gjatë së njëjtës periudhë (Fig. 1A, B).
(A) MRI -të Përfaqësuese Sekuenciale të Spine Lumbar Rabbit në 3 pikë kohe. Asnjë anomali sinjal nuk u gjet në imazhet e grupit të operacionit. (B) Karakteristikat e sinjalit të trupit vertebral në grupin ME janë të ngjashme me ato në grupin e operacionit të turpit, dhe asnjë ndryshim domethënës i sinjalit nuk vërehet në vendin e ngulitjes me kalimin e kohës. (C) Në grupin NPE, sinjali i ulët është qartë i dukshëm në sekuencën T1W, dhe sinjali i përzier dhe sinjali i ulët janë qartë të dukshëm në sekuencën T2W. Nga periudha 12-javore deri në periudhën 20-javore, sinjalet e larta sporadike që rrethojnë sinjalet e ulëta në sekuencën T2W ulen.
Hiperplazia e dukshme e kockave mund të shihet në vendin e implantimit të trupit vertebral në grupin NPE, dhe hiperplazia e kockave ndodh më shpejt nga 12 në 20 javë (Fig. 2C) në krahasim me grupin NPE, nuk është vërejtur ndonjë ndryshim i rëndësishëm në vertebralin e modeluar trupa; Grupi Sham dhe Grupi ME (Fig. 2C) 2A, B).
(A) Sipërfaqja e trupit vertebral në pjesën e implantuar është shumë e qetë, vrima shërohet mirë, dhe nuk ka hiperplazi në trupin vertebral. (B) Forma e sitit të implantuar në grupin ME është e ngjashme me atë në grupin e operacionit të turpit, dhe nuk ka ndonjë ndryshim të dukshëm në shfaqjen e sitit të implantuar me kalimin e kohës. (C) Hiperplazia e kockave ka ndodhur në vendin e implantuar në grupin NPE. Hiperplazia e kockave u rrit me shpejtësi dhe madje shtrihet përmes diskut intervertebral në trupin vertebral kontrabateral.
Analiza histologjike siguron informacion më të detajuar në lidhje me formimin e kockave. Figura 3 tregon fotografitë e seksioneve pas operacionit të njollosura me H&E. Në grupin e veprimit të turpit, kondrocitet ishin rregulluar mirë dhe nuk u zbulua përhapje e qelizave (Fig. 3A). Situata në grupin ME ishte e ngjashme me atë në grupin e operacionit të turpshëm (Fig. 3B). Sidoqoftë, në grupin NPE, një numër i madh i kondrociteve dhe përhapja e qelizave të ngjashme me NP janë vërejtur në vendin e implantimit (Fig. 3C);
(A) Trabeculae mund të shihet afër pllakës fundore, kondrocitet janë rregulluar mjeshtërisht me madhësi dhe formë të qelizave uniforme dhe pa përhapje (40 herë). (B) Gjendja e vendit të implantimit në grupin ME është e ngjashme me atë të grupit të turpit. Trabeculae dhe kondrocitet mund të shihen, por nuk ka përhapje të dukshme në vendin e implantimit (40 herë). (B) Mund të shihet se kondrocitet dhe qelizat e ngjashme me NP përhapen ndjeshëm, dhe forma dhe madhësia e kondrociteve janë të pabarabarta (40 herë).
Shprehja e mRNA interleukin 4 (IL-4), interleukin 17 (IL-17) mRNA, dhe mRNA e interferonit γ (IFN-γ) u vërejt në të dy grupet NPE dhe ME. Kur u krahasuan nivelet e shprehjes së gjeneve të synuara, shprehjet e gjeneve të IL-4, IL-17 dhe IFN-γ u rritën ndjeshëm në grupin NPE në krahasim me ato të grupit ME dhe grupit të operacionit të turpit (Fig. 4) (P <0.05). Krahasuar me grupin e funksionimit të turpit, nivelet e shprehjes së IL-4, IL-17 dhe IFN-γ në grupin ME u rritën vetëm pak dhe nuk arritën ndryshime statistikore (P> 0.05).
Shprehja mRNA e IL-4, IL-17 dhe IFN-γ në grupin NPE tregoi një prirje dukshëm më të lartë se ato në grupin e operacionit të turpshëm dhe grupin ME (p <0.05).
Në të kundërt, nivelet e shprehjes në grupin ME nuk treguan ndonjë ndryshim domethënës (P> 0.05).
Analiza e blotës perëndimore u krye duke përdorur antitrupa të disponueshëm komercialisht kundër IL-4 dhe IL-17 për të konfirmuar modelin e ndryshuar të shprehjes mRNA. Siç tregohet në figurat 5A, B, krahasuar me grupin ME dhe grupin e funksionimit të turpit, nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 në grupin NPE u rritën ndjeshëm (p <0.05). Krahasuar me grupin e funksionimit të turpit, nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 në grupin ME gjithashtu nuk arritën të arrijnë ndryshime statistikisht të rëndësishme (P> 0.05).
(A) Nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 në grupin NPE ishin dukshëm më të larta se ato në grupin ME dhe placebo (P <0.05). (B) Histogrami i blotës perëndimore.
Për shkak të numrit të kufizuar të mostrave njerëzore të marra gjatë operacionit, studimet e qarta dhe të hollësishme mbi patogjenezën e MC janë disi të vështira. Ne u përpoqëm të krijonim një model kafshësh të MC për të studiuar mekanizmat e tij të mundshëm patologjikë. Në të njëjtën kohë, vlerësimi radiologjik, vlerësimi histologjik dhe vlerësimi biologjik molekular u përdorën për të ndjekur rrjedhën e MC të shkaktuar nga autograft NP. Si rezultat, modeli i implantimit NP rezultoi në një ndryshim gradual të intensitetit të sinjalit nga pikat kohore 12-javore në 20 javë (sinjal i ulët Vlerësimet biologjike konfirmuan rezultatet e studimit radiologjik.
Rezultatet e këtij eksperimenti tregojnë se ndryshimet vizuale dhe histologjike kanë ndodhur në vendin e shkeljes së trupit vertebral në grupin NPE. Në të njëjtën kohë, janë vërejtur shprehja e gjeneve IL-4, IL-17 dhe IFN-γ, si dhe IL-4, IL-17 dhe IFN-γ, duke treguar që shkelja e indit autolog të bërthamës pulposus në vertebral Trupi mund të shkaktojë një seri të sinjalit dhe ndryshimeve morfologjike. Shtë e lehtë të zbulohet se karakteristikat e sinjalit të trupave vertebral të modelit të kafshëve (sinjal i ulët në sekuencën T1W, sinjal i përzier dhe sinjal i ulët në sekuencën T2W) janë shumë të ngjashme me ato të qelizave vertebrale njerëzore, dhe karakteristikat e MRI gjithashtu Konfirmoni vëzhgimet e histologjisë dhe anatomisë bruto, domethënë, ndryshimet në qelizat e trupit vertebral janë përparimtare. Megjithëse përgjigja inflamatore e shkaktuar nga trauma akute mund të shfaqet shpejt pas birë, rezultatet e MRI treguan se ndryshimet në rritje në mënyrë progresive të sinjalit u shfaqën 12 javë pas birë dhe vazhduan deri në 20 javë pa ndonjë shenjë të rimëkëmbjes ose kthimit të ndryshimeve të MRI. Këto rezultate sugjerojnë që NP autologjike vertebrale është një metodë e besueshme për krijimin e MV progresive në lepuj.
Ky model punkture kërkon aftësi, kohë dhe përpjekje kirurgjikale adekuate. Në eksperimentet paraprake, diseksioni ose stimulimi i tepërt i strukturave ligamentoze paravertebrale mund të rezultojë në formimin e osteofiteve vertebrale. Duhet pasur kujdes që të mos dëmtojnë ose të irritojnë disqet ngjitur. Meqenëse thellësia e depërtimit duhet të kontrollohet për të marrë rezultate të qëndrueshme dhe të riprodhueshme, ne kemi bërë manualisht një prizë duke prerë mbulesën e një gjilpërë të gjatë 3 mm. Përdorimi i kësaj prizë siguron thellësi uniforme të shpimit në trupin vertebral. Në eksperimentet paraprake, tre kirurgë ortopedikë të përfshirë në operacion gjetën gjilpëra me 16 matës më të lehtë për të punuar me sesa gjilpëra me 18 matës ose metoda të tjera. Për të shmangur gjakderdhjen e tepërt gjatë shpimit, mbajtja e gjilpërës akoma për një kohë do të sigurojë një vrimë futjeje më të përshtatshme, duke sugjeruar që një shkallë e caktuar e MC mund të kontrollohet në këtë mënyrë.
Edhe pse shumë studime kanë synuar MC, dihet pak për etiologjinë dhe patogjenezën e MC25,26,27. Bazuar në studimet tona të mëparshme, ne zbuluam se autoimuniteti luan një rol kryesor në shfaqjen dhe zhvillimin e MC12. Ky studim ekzaminoi shprehjen sasiore të IL-4, IL-17 dhe IFN-γ, të cilat janë rrugët kryesore të diferencimit të qelizave CD4+ pas stimulimit të antigjenit. Në studimin tonë, krahasuar me grupin negativ, grupi NPE kishte shprehje më të lartë të IL-4, IL-17, dhe IFN-γ, dhe nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 ishin gjithashtu më të larta.
Klinikisht, shprehja e mRNA e IL-17 është rritur në qelizat NP nga pacientët me herniation të diskut28. Rritja e niveleve të shprehjes IL-4 dhe IFN-γ u gjetën gjithashtu në një model akut të herniimit të diskut jo-kompresues në krahasim me kontrollet e shëndetshme29. IL-17 luan një rol kryesor në inflamacionin, dëmtimin e indeve në sëmundjet autoimune30 dhe rrit përgjigjen imune ndaj IFN-γ31. Lëndimi i përmirësuar i indeve të ndërmjetësuar nga IL-17 është raportuar në MRL/LPR MICE32 dhe minj të ndjeshëm të autoimunitetit. IL-4 mund të pengojë shprehjen e citokinave proinflamatore (të tilla si IL-1β dhe TNFα) dhe aktivizimit të makrofagut34. Reportedshtë raportuar se shprehja mRNA e IL-4 ishte e ndryshme në grupin NPE në krahasim me IL-17 dhe IFN-γ në të njëjtën pikë kohore; Shprehja mRNA e IFN-γ në grupin NPE ishte dukshëm më e lartë se ajo në grupet e tjera. Prandaj, prodhimi i IFN-γ mund të jetë një ndërmjetës i përgjigjes inflamatore të shkaktuar nga ndërhyrja e NP. Studimet kanë treguar që IFN-γ prodhohet nga lloje të shumëfishta qelizash, duke përfshirë qelizat e aktivizuara të ndihmës T të tipit 1, qelizat natyrore vrasëse dhe makrofagët35,36, dhe është një citokinë kryesore pro-inflamatore që promovon përgjigjet imune37.
Ky studim sugjeron që përgjigja autoimune mund të përfshihet në shfaqjen dhe zhvillimin e MC. Luoma et al. zbuloi se karakteristikat e sinjalit të MC dhe NP të shquar janë të ngjashme në MRI, dhe të dy tregojnë sinjal të lartë në sekuencën T2W38. Disa citokina janë konfirmuar se janë të lidhura ngushtë me shfaqjen e MC, siç është IL-139. Ma et al. sugjeroi që zgjatja lart ose në rënie e NP mund të ketë një ndikim të madh në shfaqjen dhe zhvillimin e MC12. Bobechko40 dhe Herzbein et al.41 raportuan se NP është një ind imunotolerant që nuk mund të hyjë në qarkullimin vaskular që nga lindja. Protrusions NP prezantojnë trupat e huaj në furnizimin me gjak, duke ndërmjetësuar kështu reaksionet lokale autoimune42. Reagimet autoimune mund të shkaktojnë një numër të madh të faktorëve imunitar, dhe kur këta faktorë i ekspozohen vazhdimisht indeve, ato mund të shkaktojnë ndryshime në sinjalizimin43. Në këtë studim, overexpression i IL-4, IL-17 dhe IFN-γ janë faktorë tipikë imunitar, duke dëshmuar më tej marrëdhëniet e ngushta midis NP dhe MCS44. Ky model i kafshëve imiton mirë përparimin e NP dhe hyrjen në pllakën fundore. Ky proces zbuloi më tej ndikimin e autoimunitetit në MC.
Siç pritej, ky model i kafshëve na siguron një platformë të mundshme për të studiuar MC. Sidoqoftë, ky model ka ende disa kufizime: së pari, gjatë fazës së vëzhgimit të kafshëve, disa lepuj në fazën e ndërmjetme duhet të euthanizohen për testimin e biologjisë histologjike dhe molekulare, kështu që disa kafshë "bien jashtë përdorimit" me kalimin e kohës. Së dyti, megjithëse tre pika kohore janë vendosur në këtë studim, për fat të keq, ne modeluam vetëm një lloj të MC (ndryshimi i tipit modik I), kështu që nuk është e mjaftueshme për të përfaqësuar procesin e zhvillimit të sëmundjes njerëzore, dhe më shumë pika kohore duhet të vendosen Më mirë vëzhgoni të gjitha ndryshimet e sinjalit. Së treti, ndryshimet në strukturën e indeve me të vërtetë mund të tregohen qartë nga ngjyrosja histologjike, por disa teknika të specializuara mund të zbulojnë më mirë ndryshimet mikrostrukturore në këtë model. Për shembull, mikroskopia e dritës së polarizuar u përdor për të analizuar formimin e fibrocartilage në disqet intervertebrale të lepurit45. Efektet afatgjata të NP në MC dhe Endplate kërkojnë studim të mëtejshëm.
Pesëdhjetë e katër lepuj të bardhë të Zelandës së Re (peshë rreth 2.5-3 kg, mosha 3-3.5 muaj) u ndanë rastësisht në grupin e funksionimit të turpit, grupin e implantimit të muskujve (ME Group) dhe grupin e implantimit të rrënjës nervore (NPE Group). Të gjitha procedurat eksperimentale u miratuan nga Komiteti i Etikës i Spitalit Tianjin, dhe metodat eksperimentale u kryen në përputhje të rreptë me udhëzimet e aprovuara.
Janë bërë disa përmirësime në teknikën kirurgjikale të S. Sobajima 46. Eachdo lepur u vendos në një pozicion anësor të kthimit dhe sipërfaqja e përparme e pesë disqeve intervertebrale të njëpasnjëshme lumbare (IVDS) u ekspozua duke përdorur një qasje retroperitoneale posterolaterale. Eachdo lepuri iu dha anestezi e përgjithshme (20% urethane, 5 ml/kg përmes venës së veshit). Një prerje gjatësore e lëkurës u bë nga skaji i poshtëm i brinjëve në buzën e legenit, 2 cm ventral në muskujt paravertebral. Shtylla e duhur anterolaterale nga L1 në L6 u ekspozua nga diseksion i mprehtë dhe i hapur i indit nënlëkuror mbivendoset, indeve retroperitoneale dhe muskujve (Fig. 6A). Niveli i diskut u përcaktua duke përdorur buzën e legenit si një pikë referimi anatomike për nivelin e diskut L5-L6. Përdorni një gjilpërë birë me 16 matës për të shpuar një vrimë afër pllakës fundore të vertebrës L5 në një thellësi prej 3 mm (Fig. 6B). Përdorni një shiringë 5 ml për të aspiruar pulposusin autolog të bërthamës në diskun intervertebral L1-L2 (Fig. 6C). Hiqni bërthamën pulposus ose muskuj sipas kërkesave të secilit grup. Pasi të thellohet vrima e stërvitjes, qepjet e absorbueshme vendosen në fascinë e thellë, fascia sipërfaqësore dhe lëkura, duke u kujdesur që të mos dëmtojnë indin periosteal të trupit vertebral gjatë operacionit.
(A) Disku L5 -L6 është i ekspozuar përmes një qasje retroperitoneale posterolaterale. (B) Përdorni një gjilpërë me 16 matës për të shpuar një vrimë afër pllakës L5. (C) MFS autologjike janë korrur.
Anestezia e përgjithshme u administrua me 20% urethane (5 ml/kg) të administruar me venë të veshit, dhe radiografitë e shpinës lumbare u përsëritën në 12, 16 dhe 20 javë pas operacionit.
Lepujt u flijuan me injeksion intramuskular të ketaminës (25.0 mg/kg) dhe pentobarbital natriumi intravenoz (1.2 g/kg) në 12, 16 dhe 20 javë pas operacionit. E gjithë shtylla kurrizore u hoq për analiza histologjike dhe u krye analiza e vërtetë. Transkriptimi sasior i kundërt (RT-QPCR) dhe blotimi perëndimor u përdorën për të zbuluar ndryshimet në faktorët imunitar.
Ekzaminimet e MRI u kryen në lepuj duke përdorur një magnet klinik 3.0 T (GE Medical Systems, Firence, SC) të pajisur me një marrës të spirales së gjymtyrëve ortogonale. Lepujt u anestezuan me 20% urethan (5 ml/kg) përmes venës së veshit dhe më pas u vendosën supine brenda magnetit me rajonin e mesit të përqendruar në një spirale sipërfaqësore rrethore me diametër 5-inç (GE Medical Systems). Imazhet e lokalizuesit të peshave koronale T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) u fituan për të përcaktuar vendndodhjen e diskut lumbar nga L3-L4 në L5-L6. Feta me peshë T2 Sagittal u fituan me cilësimet e mëposhtme: Sekuencë e shpejtë spin-echo me një kohë përsëritje (TR) prej 2200 ms dhe një kohë jehonë (TE) prej 70 ms, matricë; fusha vizuale prej 260 dhe tetë stimuj; Trashësia e prerjes ishte 2 mm, hendeku ishte 0.2 mm.
Pasi u mor fotografia e fundit dhe lepuri i fundit u vra, sham, i ngulitur muskujt dhe disqet NP u hoqën për ekzaminim histologjik. Indet ishin të fiksuara në 10% formalinë të bufferuar neutrale për 1 javë, të dekalcifikuara me acid etilenediaminetetraacetic, dhe parafinë të seksionuara. Blloqet e indeve u futën në parafinë dhe u prenë në seksione sagittale (5 μm të trasha) duke përdorur një mikrotome. Seksionet u njollosën me hematoksilinë dhe eozinë (H&E).
Pas mbledhjes së disqeve ndërvertebrale nga lepujt në secilin grup, ARN totale u ekstraktua duke përdorur një kolonë UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co, Ltd, Kinë) sipas udhëzimeve të prodhuesit dhe një Improm II Transkriptimi i Reverse (Promega Inc. , Madison, WI, USA). Transkriptimi i kundërt u krye.
RT-QPCR u krye duke përdorur një Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) dhe SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) sipas udhëzimeve të prodhuesit. Vëllimi i reaksionit PCR ishte 20 μl dhe përmbante 1.5 μl cDNA të holluar dhe 0.2 μM të secilit abetare. Abetarët u krijuan nga Oligoperfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) dhe u prodhuan nga Nanjing Golden Stewart Bioteknologji Co, Ltd (Kinë) (Tabela 1). U përdorën kushtet e mëposhtme të çiklizmit termik: Hapi fillestar i aktivizimit të polimerazës në 94 ° C për 2 min, pastaj 40 cikle prej 15 s secila në 94 ° C për denaturimin e shabllonit, pjekjen për 1 min në 60 ° C, shtrirjen dhe fluoreshencën. Matjet u kryen për 1 min në 72 ° C. Të gjitha mostrat u përforcuan tre herë dhe vlera mesatare u përdor për analizën RT-qPCR. Të dhënat e amplifikimit u analizuan duke përdorur FlexStation 3 (Pajisjet Molekulare, Sunnyvale, CA, USA). Shprehja e gjenit IL-4, IL-17 dhe IFN-γ u normalizuan në kontrollin endogjen (ACTB). Nivelet relative të shprehjes së mRNA të synuar u llogaritën duke përdorur metodën 2-ΔΔCT.
Proteina totale u ekstraktua nga indet duke përdorur një homogjenizues të indeve në tamponin e lizës RIPA (që përmban një koktej frenues të proteazës dhe fosfatazës) dhe më pas u centrifugua në 13,000 rpm për 20 min në 4 ° C për të hequr mbeturinat e indeve. Pesëdhjetë mikrogramë të proteinave u ngarkuan për korsi, u ndanë me 10% SDS-PAGE, dhe më pas u transferuan në një membranë PVDF. Bllokimi u krye në 5% qumësht të thatë jo të yndyrshëm në kripëra të bufferuara nga Tris (TBS) që përmbante 0.1% Tween 20 për 1 orë në temperaturën e dhomës. Membrana u inkubua me antitrupë parësor anti-decorin të lepurit (holluar 1: 200; Boster, Wuhan, Kinë) (holluar 1: 200; Bioss, Pekin, Kinë) brenda natës në 4 ° C dhe reagoi në ditët e dyta; me antitrupë sekondarë (imunoglobulin G dhi anti-lepuri G në hollimin 1: 40,000) të kombinuar me peroksidazën e rrikë (Boster, Wuhan, Kinë) për 1 orë në temperaturën e dhomës. Sinjalet e blotës perëndimore u zbuluan nga rritja e kimiluminescencës në membranën kimilumineshente pas rrezatimit me rreze X. Për analizën densitometrike, njollat u skanuan dhe u përcaktuan në sasi duke përdorur softuerin e bandës dhe rezultatet u shprehën si raport i imunoreaktivitetit të gjenit të synuar ndaj imunoreaktivitetit të tubulinës.
Llogaritjet statistikore u kryen duke përdorur paketën e softuerit SPSS16.0 (SPSS, USA). Të dhënat e mbledhura gjatë studimit u shprehën si devijim mesatar ± (mesatarja ± SD) dhe u analizuan duke përdorur analizën e masave të përsëritura të njëanshme të variancës (ANOVA) për të përcaktuar ndryshimet midis dy grupeve. P <0.05 u konsiderua statistikisht e rëndësishme.
Kështu, krijimi i një modeli kafshësh të MC duke implantuar NP autologjikë në trupin vertebral dhe duke kryer vëzhgim makroanatomik, analiza MRI, vlerësimi histologjik dhe analiza biologjike molekulare mund të bëhet një mjet i rëndësishëm për vlerësimin dhe kuptimin e mekanizmave të MC të njeriut dhe zhvillimin ndërhyrje.
Si të citoni këtë artikull: Han, C. et al. Një model kafshësh i ndryshimeve modike u krijua duke implantuar pulposusin e bërthamës autologjike në kockën nënkondrale të shpinës lumbare. Sci Rep. 6, 35102: 10.1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., and Boos, N. Imazhi i rezonancës magnetike të shpinës lumbare: Prevalenca e hernisimit dhe mbajtjes së diskut, kompresimi i rrënjës nervore, anomalitë e pllakave fundore dhe osteartri i përbashkët i fytyrës në vëllim asimptomatikë . normë Radiologjia 209, 661–666, doi: 10.1148/radiologji.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, dhe Leboeuf-Eed, K. Ndryshimet modike dhe marrëdhënia e tyre me gjetjet klinike. Revista Evropiane e Shpinë: Botimi Zyrtar i Shoqërisë Evropiane të Shtyllës kurrizore, Shoqëria Evropiane e Deformimit kurrizor dhe Shoqëria Evropiane për Kërkime të Kurrizit të Qafës së mitrës 15, 1312–1319, doi: 10.1007/S00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et al. Ndryshimet modike në endplatet vertebrale lumbare: Prevalenca dhe shoqërimi me dhimbje të shpinës dhe dhimbje të nervit të nervit të mesëm në punëtorët meshkuj të moshës së mesme. Shpinë 32, 1116–1122, doi: 10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., dhe Dalinka, M. MRI i palcës së eshtrave ndryshon afër pllakës fundore në sëmundjen degjenerative të shtyllës kurrizore. Ajr Revista Amerikane e Radiologjisë 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modik, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, dhe Carter, JR Sëmundja Disk Degjenerative: Vlerësimi i palcës vertebrale ndryshon me MRI. Radiologjia 166, 193–199, doi: 10.1148/Radiologjia.166.1.3336678 (1988).
Modik, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, dhe Carter, JR Imazhe të sëmundjes degjenerative të diskut. Radiologjia 168, 177–186, doi: 10.1148/Radiologjia.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Parashikuesit e ndryshimeve të sinjalit neovertebral (modik) të sinjalit në popullatën e përgjithshme. Revista Evropiane e Shpinë: Botimi Zyrtar i Shoqërisë Evropiane të Shtyllës kurrizore, Shoqëria Evropiane e Deformimit kurrizor, dhe Shoqëria Evropiane për Kërkime të Kurrizit të Qafës së mitrës, Divizioni 19, 129–135, DOI: 10.1007/S00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB dhe Mannisch, K. Ndryshimet modike pas hernisimit të diskut lumbar. Revista Evropiane e Shpinë: Botimi Zyrtar i Shoqërisë Evropiane të Shtyllës kurrizore, Shoqëria Evropiane e Deformimit kurrizor dhe Shoqëria Evropiane për Kërkime të Kurrizit të Qafës së mitrës 16, 977–982, doi: 10.1007/S00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., dhe Kaapa, E. Ndryshimet e tipit I Modik mund të parashikojnë degjenerimin e diskut deformues të shpejtë progresiv: Një studim i ardhshëm 1-vjeçar. Revista Evropiane e Spine 21, 1135–1142, doi: 10.1007/S00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ dhe Fan, SW Ndryshimet modike: Shkaqet e mundshme dhe kontributi në degjenerimin e diskut lumbar. Hipotezat mjekësore 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, Këputja e Diskut të Brendshëm HV. Problemet e prolapsit të diskut gjatë 50 viteve. Shpinë (Phila PA 1976) 11, 650–653 (1986).
Koha e postimit: Dhjetor-13-2024