Faleminderit që vizituat Nature.com. Versioni i shfletuesit që po përdorni ka mbështetje të kufizuar për CSS. Për rezultate më të mira, rekomandojmë përdorimin e një shfletuesi më të ri (ose çaktivizimin e modalitetit të përputhshmërisë në Internet Explorer). Ndërkohë, për të siguruar mbështetje të vazhdueshme, ne do ta shfaqim sajtin pa stile dhe JavaScript.
Krijimi i modeleve shtazore të ndryshimit modik (MC) është një bazë e rëndësishme për studimin e MC. Pesëdhjetë e katër lepuj të bardhë të Zelandës së Re u ndanë në grupin e operacionit të rremë, grupin e implantimit të muskujve (grupi ME) dhe grupin e implantimit të bërthamës pulposus (grupi NPE). Në grupin NPE, disku ndërvertebral u ekspozua me qasje kirurgjikale lumbare anterolaterale dhe një gjilpërë u përdor për të shpuar trupin vertebral L5 pranë pllakës fundore. NP u nxor nga disku ndërvertebror L1/2 me një shiringë dhe u injektua në të. Shpimi i një vrime në kockën subkondrale. Procedurat kirurgjikale dhe metodat e shpimit në grupin e implantimit të muskujve dhe grupin e operacionit të falsifikuar ishin të njëjta me ato në grupin e implantimit të NP. Në grupin ME, një pjesë muskulore ishte vendosur në vrimë, ndërsa në grupin e operacionit të rremë, asgjë nuk ishte vendosur në vrimë. Pas operacionit është kryer skanimi MRI dhe testimi biologjik molekular. Sinjali në grupin NPE ndryshoi, por nuk kishte asnjë ndryshim të dukshëm të sinjalit në grupin e operacionit të rremë dhe grupin ME. Vëzhgimi histologjik tregoi se u vu re proliferim jonormal i indeve në vendin e implantimit dhe shprehja e IL-4, IL-17 dhe IFN-γ u rrit në grupin NPE. Implantimi i NP në kockën subkondrale mund të formojë një model shtazor të MC.
Ndryshimet modike (MC) janë lezione të pllakave fundore vertebrale dhe palcës kockore ngjitur të dukshme në imazhet e rezonancës magnetike (MRI). Ato janë mjaft të zakonshme tek individët me simptoma shoqëruese1. Shumë studime kanë theksuar rëndësinë e MC për shkak të lidhjes së tij me dhimbjen e mesit (LBP) 2,3. de Roos et al.4 dhe Modic et al.5 fillimisht përshkruan tre lloje të ndryshme të anomalive të sinjalit subkondral në palcën e eshtrave vertebrale. Ndryshimet modike të tipit I janë hipointense në sekuencat me peshë T1 (T1W) dhe hiperintense në sekuencat me peshë T2 (T2W). Ky lezion zbulon pllakat fundore të çarjes dhe indin e granulimit vaskular ngjitur në palcën e eshtrave. Ndryshimet modic të tipit II tregojnë sinjal të lartë në të dy sekuencat T1W dhe T2W. Në këtë lloj lezioni, mund të konstatohet shkatërrim i pllakës fundore, si dhe zëvendësim histologjik yndyror i palcës kockore fqinje. Ndryshimet modic të tipit III tregojnë sinjal të ulët në sekuencat T1W dhe T2W. Janë vërejtur lezione sklerotike që korrespondojnë me pllakat fundore6. MC konsiderohet një sëmundje patologjike e shtyllës kurrizore dhe është e lidhur ngushtë me shumë sëmundje degjenerative të shtyllës kurrizore7,8,9.
Duke marrë parasysh të dhënat e disponueshme, disa studime kanë dhënë njohuri të detajuara mbi etiologjinë dhe mekanizmat patologjikë të MC. Albert et al. sugjeroi se MC mund të shkaktohet nga hernia diskale8. Hu et al. i atribuohet MC degjenerimit të rëndë të diskut10. Kroc propozoi konceptin e "këputjes së brendshme të diskut", i cili thotë se trauma e përsëritur e diskut mund të çojë në mikrokëputje në pllakën fundore. Pas formimit të çarjes, shkatërrimi i pllakës fundore nga bërthama pulposus (NP) mund të shkaktojë një përgjigje autoimune, e cila më tej çon në zhvillimin e MC11. Ma et al. ndanë një pikëpamje të ngjashme dhe raportuan se autoimuniteti i induktuar nga NP luan një rol kyç në patogjenezën e MC12.
Qelizat e sistemit imunitar, veçanërisht limfocitet T ndihmëse CD4+, luajnë një rol kritik në patogjenezën e autoimunitetit13. Nëngrupi Th17 i zbuluar së fundmi prodhon citokinën proinflamatore IL-17, nxit shprehjen e kemokinës dhe stimulon qelizat T në organet e dëmtuara për të prodhuar IFN-γ14. Qelizat Th2 gjithashtu luajnë një rol unik në patogjenezën e përgjigjeve imune. Shprehja e IL-4 si qelizë përfaqësuese Th2 mund të çojë në pasoja të rënda imunopatologjike15.
Edhe pse shumë studime klinike janë kryer në MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, ka ende mungesë të modeleve të përshtatshme eksperimentale të kafshëve që mund të imitojnë procesin MC që ndodh shpesh tek njerëzit dhe mund të jetë përdoret për të hetuar etiologjinë ose trajtime të reja si terapia e synuar. Deri më sot, vetëm disa modele të kafshëve të MC janë raportuar për të studiuar mekanizmat patologjikë themelorë.
Bazuar në teorinë autoimune të propozuar nga Albert dhe Ma, ky studim krijoi një model MC të thjeshtë dhe të riprodhueshëm të lepurit duke autotransplantuar NP pranë pllakës fundore vertebrale të shpuar. Objektiva të tjerë janë vëzhgimi i karakteristikave histologjike të modeleve të kafshëve dhe vlerësimi i mekanizmave specifikë të NP në zhvillimin e MC. Për këtë qëllim, ne përdorim teknika të tilla si biologjia molekulare, MRI dhe studimet histologjike për të studiuar progresionin e MC.
Dy lepuj ngordhën nga gjakderdhja gjatë operacionit dhe katër lepuj vdiqën gjatë anestezisë gjatë MRI. 48 lepujt e mbetur mbijetuan dhe nuk treguan shenja të sjelljes apo neurologjike pas operacionit.
MRI tregon se intensiteti i sinjalit të indit të ngulitur në vrima të ndryshme është i ndryshëm. Intensiteti i sinjalit të trupit vertebral L5 në grupin NPE ndryshoi gradualisht në 12, 16 dhe 20 javë pas futjes (sekuenca T1W tregoi sinjal të ulët dhe sekuenca T2W tregoi sinjal të përzier plus sinjal të ulët) (Fig. 1C), ndërsa shfaqja e MRI nga dy grupet e tjera të pjesëve të ngulitura mbetën relativisht të qëndrueshme gjatë së njëjtës periudhë (Fig. 1A, B).
(A) MRI sekuenciale përfaqësuese të shtyllës kurrizore lumbare të lepurit në 3 pika kohore. Asnjë anomali në sinjal nuk u gjet në imazhet e grupit të operacionit të rremë. (B) Karakteristikat e sinjalit të trupit vertebral në grupin ME janë të ngjashme me ato në grupin e operacionit të rremë dhe nuk vërehet asnjë ndryshim domethënës i sinjalit në vendin e futjes me kalimin e kohës. (C) Në grupin NPE, sinjali i ulët është qartë i dukshëm në sekuencën T1W dhe sinjali i përzier dhe sinjali i ulët janë qartë të dukshëm në sekuencën T2W. Nga periudha 12-javore në periudhën 20-javore, sinjalet e larta sporadike që rrethojnë sinjalet e ulëta në sekuencën T2W ulen.
Hiperplazia e dukshme e kockave mund të shihet në vendin e implantimit të trupit vertebral në grupin NPE, dhe hiperplazia e kockës ndodh më shpejt nga 12 deri në 20 javë (Fig. 2C) krahasuar me grupin NPE, nuk vërehet asnjë ndryshim domethënës në vertebralin e modeluar. trupat; Grupi sham dhe grupi ME (Fig. 2C) 2A,B).
(A) Sipërfaqja e trupit vertebral në pjesën e implantuar është shumë e lëmuar, vrima shërohet mirë dhe nuk ka hiperplazi në trupin vertebral. (B) Forma e vendit të implantuar në grupin ME është e ngjashme me atë në grupin e operacionit të falsifikuar dhe nuk ka ndryshim të dukshëm në pamjen e vendit të implantuar me kalimin e kohës. (C) Hiperplazia e kockave ndodhi në vendin e implantuar në grupin NPE. Hiperplazia e kockave u rrit me shpejtësi dhe madje u shtri përmes diskut ndërvertebral në trupin vertebral kontralateral.
Analiza histologjike jep informacion më të detajuar rreth formimit të kockave. Figura 3 tregon fotografitë e seksioneve postoperative të lyera me H&E. Në grupin e operacionit të rremë, kondrocitet ishin rregulluar mirë dhe nuk u zbulua proliferim qelizor (Fig. 3A). Situata në grupin ME ishte e ngjashme me atë në grupin e operacioneve të rreme (Fig. 3B). Megjithatë, në grupin NPE, një numër i madh kondrocitesh dhe proliferim i qelizave të ngjashme me NP u vu re në vendin e implantimit (Fig. 3C);
(A) Trabekulat mund të shihen pranë pllakës fundore, kondrocitet janë rregulluar mirë me madhësi dhe formë qelizore uniforme dhe pa përhapje (40 herë). (B) Gjendja e vendit të implantimit në grupin ME është e ngjashme me atë të grupit sham. Trabekulat dhe kondrocitet mund të shihen, por nuk ka proliferim të dukshëm në vendin e implantimit (40 herë). (B) Mund të shihet se kondrocitet dhe qelizat e ngjashme me NP-në shumohen ndjeshëm, dhe forma dhe madhësia e kondrociteve janë të pabarabarta (40 herë).
Shprehja e mRNA e interleukinës 4 (IL-4), mRNA e interleukinës 17 (IL-17) dhe mRNA e interferonit γ (IFN-γ) u vëzhguan në të dy grupet NPE dhe ME. Kur u krahasuan nivelet e shprehjes së gjeneve të synuara, shprehjet e gjeneve të IL-4, IL-17 dhe IFN-γ u rritën ndjeshëm në grupin NPE krahasuar me ato të grupit ME dhe grupit të operacionit fals (Fig. 4) (P <0.05). Krahasuar me grupin e operacionit fals, nivelet e shprehjes së IL-4, IL-17 dhe IFN-γ në grupin ME u rritën vetëm pak dhe nuk arritën ndryshim statistikor (P > 0.05).
Shprehja e mRNA e IL-4, IL-17 dhe IFN-γ në grupin NPE tregoi një tendencë dukshëm më të lartë se ato në grupin e operacionit të rremë dhe grupin ME (P <0.05).
Në të kundërt, nivelet e shprehjes në grupin ME nuk treguan ndonjë ndryshim domethënës (P>0.05).
Analiza Western blot u krye duke përdorur antitrupa të disponueshëm në treg kundër IL-4 dhe IL-17 për të konfirmuar modelin e ndryshuar të shprehjes së mRNA. Siç tregohet në figurat 5A, B, krahasuar me grupin ME dhe grupin e operacionit të falsifikuar, nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 në grupin NPE u rritën ndjeshëm (P <0.05). Krahasuar me grupin e operacionit fals, nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 në grupin ME gjithashtu nuk arritën ndryshime statistikisht të rëndësishme (P> 0.05).
(A) Nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 në grupin NPE ishin dukshëm më të larta se ato në grupin ME dhe grupin placebo (P <0.05). (B) Histograma Western blot.
Për shkak të numrit të kufizuar të mostrave njerëzore të marra gjatë operacionit, studimet e qarta dhe të detajuara mbi patogjenezën e MC janë disi të vështira. Ne u përpoqëm të krijonim një model kafshësh të MC për të studiuar mekanizmat e tij të mundshëm patologjikë. Në të njëjtën kohë, vlerësimi radiologjik, vlerësimi histologjik dhe vlerësimi biologjik molekular u përdorën për të ndjekur rrjedhën e MC të induktuar nga autografti NP. Si rezultat, modeli i implantimit NP rezultoi në një ndryshim gradual në intensitetin e sinjalit nga pikat kohore 12-javore në 20-javore (sinjal të përzier të ulët në sekuencat T1W dhe sinjal të ulët në sekuencat T2W), duke treguar ndryshimet e indeve dhe histologjike dhe molekulare vlerësimet biologjike konfirmuan rezultatet e studimit radiologjik.
Rezultatet e këtij eksperimenti tregojnë se ndryshimet vizuale dhe histologjike ndodhën në vendin e dëmtimit të trupit vertebral në grupin NPE. Në të njëjtën kohë, u vërejt shprehja e gjeneve IL-4, IL-17 dhe IFN-γ, si dhe IL-4, IL-17 dhe IFN-γ, duke treguar se cenimi i indit pulposus të bërthamës autologe në vertebral trupi mund të shkaktojë një sërë ndryshimesh sinjalizuese dhe morfologjike. Është e lehtë të zbulohet se karakteristikat e sinjalit të trupave vertebralë të modelit të kafshëve (sinjali i ulët në sekuencën T1W, sinjali i përzier dhe sinjali i ulët në sekuencën T2W) janë shumë të ngjashme me ato të qelizave vertebrale njerëzore, dhe karakteristikat e MRI gjithashtu konfirmojnë vëzhgimet e histologjisë dhe anatomisë bruto, domethënë ndryshimet në qelizat e trupit vertebral janë progresive. Megjithëse përgjigja inflamatore e shkaktuar nga trauma akute mund të shfaqet menjëherë pas punksionit, rezultatet e MRI treguan se ndryshimet në rritje progresive të sinjalit u shfaqën 12 javë pas punksionit dhe vazhduan deri në 20 javë pa asnjë shenjë rikuperimi ose ndryshimi të ndryshimeve të MRI. Këto rezultate sugjerojnë se NP vertebrale autologe është një metodë e besueshme për vendosjen e MV progresive te lepujt.
Ky model shpimi kërkon aftësi, kohë dhe përpjekje të mjaftueshme kirurgjikale. Në eksperimentet paraprake, diseksioni ose stimulimi i tepërt i strukturave ligamentoze paravertebrale mund të rezultojë në formimin e osteofiteve vertebrale. Duhet pasur kujdes që të mos dëmtohen ose irritohen disqet ngjitur. Meqenëse thellësia e depërtimit duhet të kontrollohet për të marrë rezultate të qëndrueshme dhe të riprodhueshme, ne bëmë manualisht një prizë duke prerë këllëfin e një gjilpëre 3 mm të gjatë. Përdorimi i kësaj prize siguron thellësi uniforme të shpimit në trupin vertebral. Në eksperimentet paraprake, tre kirurgë ortopedë të përfshirë në operacion gjetën gjilpëra me 16 matës më të lehtë për t'u punuar sesa me gjilpëra me diametër 18 ose metoda të tjera. Për të shmangur gjakderdhjen e tepërt gjatë shpimit, mbajtja e gjilpërës pa lëvizur për një kohë do të sigurojë një vrimë më të përshtatshme për futje, duke sugjeruar që një shkallë e caktuar MC mund të kontrollohet në këtë mënyrë.
Megjithëse shumë studime kanë synuar MC-në, dihet pak për etiologjinë dhe patogjenezën e MC25,26,27. Bazuar në studimet tona të mëparshme, ne zbuluam se autoimuniteti luan një rol kyç në shfaqjen dhe zhvillimin e MC12. Ky studim ekzaminoi shprehjen sasiore të IL-4, IL-17 dhe IFN-γ, të cilat janë rrugët kryesore të diferencimit të qelizave CD4+ pas stimulimit të antigjenit. Në studimin tonë, krahasuar me grupin negativ, grupi NPE kishte shprehje më të lartë të IL-4, IL-17 dhe IFN-γ, dhe nivelet e proteinave të IL-4 dhe IL-17 ishin gjithashtu më të larta.
Klinikisht, shprehja e mRNA IL-17 është rritur në qelizat NP nga pacientët me hernie diskale28. Rritje të niveleve të shprehjes së IL-4 dhe IFN-γ u gjetën gjithashtu në një model hernie diskale akute jo-kompresive krahasuar me kontrollet e shëndetshme29. IL-17 luan një rol kyç në inflamacion, dëmtim të indeve në sëmundjet autoimune30 dhe rrit përgjigjen imune ndaj IFN-γ31. Një dëmtim i zgjeruar i indeve i ndërmjetësuar nga IL-17 është raportuar në minjtë MRL/lpr32 dhe minjtë e ndjeshëm ndaj autoimunitetit33. IL-4 mund të pengojë shprehjen e citokineve proinflamatore (si IL-1β dhe TNFα) dhe aktivizimin e makrofagëve34. Është raportuar se shprehja e mRNA e IL-4 ishte e ndryshme në grupin NPE krahasuar me IL-17 dhe IFN-γ në të njëjtën pikë kohore; Shprehja e mRNA e IFN-γ në grupin NPE ishte dukshëm më e lartë se ajo në grupet e tjera. Prandaj, prodhimi i IFN-γ mund të jetë një ndërmjetës i përgjigjes inflamatore të shkaktuar nga ndërthurja e NP. Studimet kanë treguar se IFN-γ prodhohet nga lloje të shumta qelizash, duke përfshirë qelizat T ndihmëse të aktivizuara të tipit 1, qelizat vrasëse natyrore dhe makrofagët35,36 dhe është një citokinë kyçe pro-inflamatore që nxit përgjigjet imune37.
Ky studim sugjeron që përgjigja autoimune mund të përfshihet në shfaqjen dhe zhvillimin e MC. Luoma etj. zbuloi se karakteristikat e sinjalit të MC dhe NP të spikatur janë të ngjashme në MRI, dhe të dyja tregojnë sinjal të lartë në sekuencën T2W38. Disa citokina janë konfirmuar të jenë të lidhura ngushtë me shfaqjen e MC, si IL-139. Ma et al. sugjeroi që zgjatja lart ose poshtë e NP mund të ketë një ndikim të madh në shfaqjen dhe zhvillimin e MC12. Bobechko40 dhe Herzbein et al.41 raportuan se NP është një ind imunotolerant që nuk mund të hyjë në qarkullimin vaskular që nga lindja. Zgjatjet e NP futin trupa të huaj në furnizimin me gjak, duke ndërmjetësuar në këtë mënyrë reaksionet autoimune lokale42. Reaksionet autoimune mund të shkaktojnë një numër të madh faktorësh imunitarë dhe kur këta faktorë ekspozohen vazhdimisht ndaj indeve, ato mund të shkaktojnë ndryshime në sinjalizimin43. Në këtë studim, mbishprehja e IL-4, IL-17 dhe IFN-γ janë faktorë tipik imunitar, duke vërtetuar më tej marrëdhënien e ngushtë midis NP dhe MCs44. Ky model i kafshëve imiton mirë përparimin e NP dhe hyrjen në pllakën fundore. Ky proces zbuloi më tej ndikimin e autoimunitetit në MC.
Siç pritej, ky model i kafshëve na ofron një platformë të mundshme për të studiuar MC. Megjithatë, ky model ka ende disa kufizime: së pari, gjatë fazës së vëzhgimit të kafshëve, disa lepuj të fazës së ndërmjetme duhet të eutanizohen për teste histologjike dhe biologjike molekulare, kështu që disa kafshë "bien jashtë përdorimit" me kalimin e kohës. Së dyti, megjithëse në këtë studim janë vendosur tre pika kohore, për fat të keq, ne modeluam vetëm një lloj MC (ndryshimi i tipit Modic I), kështu që nuk mjafton për të përfaqësuar procesin e zhvillimit të sëmundjes njerëzore dhe duhet të vendosen më shumë pika kohore për të vëzhgoni më mirë të gjitha ndryshimet e sinjalit. Së treti, ndryshimet në strukturën e indeve vërtet mund të tregohen qartë nga ngjyrosja histologjike, por disa teknika të specializuara mund të zbulojnë më mirë ndryshimet mikrostrukturore në këtë model. Për shembull, mikroskopi i dritës së polarizuar është përdorur për të analizuar formimin e fibrokërcit në disqet ndërvertebrale të lepurit45. Efektet afatgjata të NP në MC dhe pllakën fundore kërkojnë studim të mëtejshëm.
Pesëdhjetë e katër lepuj të bardhë meshkuj të Zelandës së Re (pesha rreth 2.5-3 kg, mosha 3-3.5 muajsh) u ndanë rastësisht në grupin e operacionit fals, grupin e implantimit të muskujve (grupi ME) dhe grupin e implantimit të rrënjëve nervore (grupi NPE). Të gjitha procedurat eksperimentale u miratuan nga Komiteti i Etikës i Spitalit Tianjin dhe metodat eksperimentale u kryen në përputhje të plotë me udhëzimet e miratuara.
Disa përmirësime janë bërë në teknikën kirurgjikale të S. Sobajima 46 . Secili lepur u vendos në një pozicion shtrirjeje anësore dhe sipërfaqja e përparme e pesë disqeve ndërvertebrale lumbare të njëpasnjëshme (IVD) u ekspozua duke përdorur një qasje retroperitoneale posterolaterale. Secilit lepur iu dha anestezi e përgjithshme (20% uretani, 5 ml/kg nëpërmjet venës së veshit). Është bërë një prerje gjatësore e lëkurës nga buza e poshtme e brinjëve deri në buzën e legenit, 2 cm nga barku në muskujt paravertebral. Shpina e djathtë anterolaterale nga L1 në L6 u ekspozua nga diseksioni i mprehtë dhe i hapur i indit nënlëkuror, indit retroperitoneal dhe muskujve (Fig. 6A). Niveli i diskut u përcaktua duke përdorur buzën e legenit si një pikë referimi anatomike për nivelin e diskut L5-L6. Përdorni një gjilpërë shpuese me diametër 16 për të shpuar një vrimë pranë pllakës fundore të vertebrës L5 në një thellësi prej 3 mm (Fig. 6B). Përdorni një shiringë 5 ml për të aspiruar bërthamën autologe pulposus në diskun ndërvertebral L1-L2 (Fig. 6C). Hiqni bërthamën pulposus ose muskulin sipas kërkesave të secilit grup. Pasi vrima e shpimit të jetë thelluar, qepjet e absorbueshme vendosen në fascinë e thellë, fascinë sipërfaqësore dhe lëkurë, duke u kujdesur që gjatë operacionit të mos dëmtohet indi periosteal i trupit vertebral.
(A) Disku L5-L6 ekspozohet nëpërmjet një qasjeje retroperitoneale posterolaterale. (B) Përdorni një gjilpërë me matës 16 për të shpuar një vrimë pranë pllakës fundore L5. (C) MF-të autologe janë korrur.
Anestezia e përgjithshme u administrua me 20% uretani (5 ml/kg) të administruar përmes venës së veshit dhe radiografitë e shtyllës kurrizore u përsëritën në javën 12, 16 dhe 20 pas operacionit.
Lepujt u sakrifikuan me injeksion intramuskular të ketaminës (25.0 mg/kg) dhe pentobarbital natriumi intravenoz (1.2 g/kg) në javët 12, 16 dhe 20 pas operacionit. E gjithë shtylla kurrizore është hequr për analizë histologjike dhe është bërë analiza reale. Transkriptimi sasior i kundërt (RT-qPCR) dhe Western blotting u përdorën për të zbuluar ndryshimet në faktorët imun.
Ekzaminimet MRI u kryen te lepujt duke përdorur një magnet klinik 3.0 T (GE Medical Systems, Firence, SC) të pajisur me një marrës të spirales ortogonale të gjymtyrëve. Lepujt u anestezuan me 20% uretani (5 mL/kg) nëpërmjet venës së veshit dhe më pas u vendosën në shpinë brenda magnetit me rajonin e mesit të përqendruar në një spirale sipërfaqësore rrethore me diametër 5 inç (GE Medical Systems). Imazhet e lokalizuesit me peshë T2 koronale (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) u morën për të përcaktuar vendndodhjen e diskut të mesit nga L3-L4 në L5-L6. Feta të peshuara në rrafshin sagittal T2 u morën me cilësimet e mëposhtme: sekuencë e shpejtë spin-echo me një kohë përsëritjeje (TR) prej 2200 ms dhe një kohë eko (TE) prej 70 ms, matricë; fushë pamore prej 260 dhe tetë stimujsh; Trashësia e prerjes ishte 2 mm, hendeku ishte 0.2 mm.
Pasi u mor fotografia e fundit dhe u vra lepuri i fundit, disqet e rremë, të ngulitur në muskuj dhe NP u hoqën për ekzaminim histologjik. Indet u fiksuan në formalinë neutrale 10% për 1 javë, u dekalcifikuan me acid etilendiaminetraacetik dhe u ndanë parafine. Blloqet e indeve u futën në parafinë dhe u prenë në seksione sagitale (5 μm të trasha) duke përdorur një mikrotomë. Seksionet u ngjyrosën me hematoksilin dhe eozinë (H&E).
Pas mbledhjes së disqeve ndërvertebrale nga lepujt në secilin grup, ARN totale u nxor duke përdorur një kolonë UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kinë) sipas udhëzimeve të prodhuesit dhe një sistem transkriptimi të kundërt ImProm II (Promega Inc. , Madison, WI, SHBA). U krye transkriptimi i kundërt.
RT-qPCR u krye duke përdorur një Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) dhe SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) sipas udhëzimeve të prodhuesit. Vëllimi i reagimit PCR ishte 20 μl dhe përmbante 1.5 μl cDNA të holluar dhe 0.2 μM të secilit primer. Primerët janë projektuar nga OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) dhe janë prodhuar nga Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kinë) (Tabela 1). U përdorën kushtet e mëposhtme të ciklit termik: hapi fillestar i aktivizimit të polimerazës në 94°C për 2 minuta, më pas 40 cikle nga 15 s secila në 94°C për denatyrimin e shabllonit, pjekja për 1 min në 60°C, zgjatje dhe fluoreshencë. Matjet u kryen për 1 min në 72°C. Të gjitha mostrat u përforcuan tre herë dhe vlera mesatare u përdor për analizën RT-qPCR. Të dhënat e amplifikimit u analizuan duke përdorur FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Shprehja e gjenit IL-4, IL-17 dhe IFN-γ u normalizua në kontrollin endogjen (ACTB). Nivelet e shprehjes relative të mARN-së së synuar u llogaritën duke përdorur metodën 2-ΔΔCT.
Proteina totale u nxor nga indet duke përdorur një homogjenizues të indeve në tampon lize RIPA (që përmban një koktej frenues të proteazës dhe fosfatazës) dhe më pas u centrifugua në 13,000 rpm për 20 minuta në 4°C për të hequr mbeturinat e indeve. Pesëdhjetë mikrogramë proteina u ngarkuan për korsi, u ndanë me 10% SDS-PAGE dhe më pas u transferuan në një membranë PVDF. Bllokimi u krye në qumësht të thatë 5% pa yndyrë në kripur Tris-bufer (TBS) që përmban 0.1% Tween 20 për 1 orë në temperaturën e dhomës. Membrana u inkubua me antitrup primar anti-dekorin lepuri (i holluar 1:200; Boster, Wuhan, Kinë) (i holluar 1:200; Bioss, Pekin, Kinë) gjatë natës në 4°C dhe reagoi në ditët e dyta; me antitrup sekondar (imunoglobulina G dhie kundër lepurit në hollimin 1:40,000) e kombinuar me peroksidazën e rrikës (Boster, Wuhan, Kinë) për 1 orë në temperaturën e dhomës. Sinjalet e Western blot u zbuluan nga rritja e kimilumineshencës në membranën kemilumineshente pas rrezatimit me rreze X. Për analizën densitometrike, blotet u skanuan dhe u matën duke përdorur softuerin BandScan dhe rezultatet u shprehën si raport i imunoreaktivitetit të gjenit të synuar ndaj imunoreaktivitetit të tubulinës.
Llogaritjet statistikore janë kryer duke përdorur paketën softuerike SPSS16.0 (SPSS, SHBA). Të dhënat e mbledhura gjatë studimit u shprehën si mesatare ± devijimi standard (mesatarja ± SD) dhe u analizuan duke përdorur analizën e variancës me masa të përsëritura njëkahëshe (ANOVA) për të përcaktuar dallimet midis dy grupeve. P <0.05 u konsiderua statistikisht i rëndësishëm.
Kështu, krijimi i një modeli kafshëror të MC duke implantuar NP autologe në trupin vertebral dhe kryerjen e vëzhgimeve makroanatomike, analizës MRI, vlerësimit histologjik dhe analizës biologjike molekulare mund të bëhet një mjet i rëndësishëm për vlerësimin dhe kuptimin e mekanizmave të MC të njeriut dhe zhvillimin e ri terapeutik. ndërhyrjet.
Si të citojmë këtë artikull: Han, C. et al. Një model kafshësh i ndryshimeve Modic u krijua duke implantuar bërthamën autologe pulposus në kockën subkondrale të shtyllës kurrizore lumbare. Shkencë. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., dhe Boos, N. Imazhe me rezonancë magnetike të shtyllës kurrizore lumbare: prevalenca e hernies dhe mbajtjes së diskut, ngjeshja e rrënjëve nervore, anomalitë e pllakës fundore dhe osteoartriti i nyjeve të fytyrës në vullnetarë asimptomatikë . norma. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Ndryshimet Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS dhe Leboeuf-Eed, K. Modic dhe lidhja e tyre me gjetjet klinike. European Spine Journal: publikimi zyrtar i Shoqatës Evropiane të Shpinës, Shoqërisë Evropiane të Deformimit të Shpinës dhe Shoqatës Evropiane për Kërkimin e Shpinës së Qafës së mitrës 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., etj. Ndryshimet modike në pllakat fundore vertebrale lumbare: prevalenca dhe shoqërimi me dhimbjen e mesit dhe dhimbjet e nervit shiatik në punëtorët meshkuj të moshës së mesme. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., dhe Dalinka, M. MRI e ndryshimeve të palcës kockore pranë pllakës fundore në sëmundjen degjenerative të shtyllës kurrizore lumbare. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ dhe Carter, JR Sëmundja degjenerative e diskut: vlerësimi i ndryshimeve të palcës vertebrale me MRI. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS dhe Carter, JR Imazhe e sëmundjes degjenerative të diskut. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Parashikuesit e pllakës fundore neovertebrale (Modic) sinjalizojnë ndryshimet në popullatën e përgjithshme. Gazeta Evropiane e Shpinës: Publikimi Zyrtar i Shoqërisë Evropiane të Shpinës, Shoqëria Evropiane e Deformimit të Shpinës dhe Shoqëria Evropiane për Kërkimin e Shpinës së Qafës së Qafës, Divizioni 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB dhe Mannisch, K. Modic ndryshimet pas hernies diskale lumbare. Gazeta Evropiane e Shpinës: Publikimi Zyrtar i Shoqatës Evropiane të Shpinës, Shoqëria Evropiane e Deformimit të Shpinës dhe Shoqëria Evropiane për Kërkimin e Shpinës së Qafës së mitrës 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., dhe Kaapa, E. Modic tip I ndryshimet mund të parashikojnë degjenerimin e diskut deformues me shpejtësi progresive: një studim prospektiv 1-vjeçar. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ dhe Fan, SW Modic Ndryshimet: shkaqet e mundshme dhe kontributi në degjenerimin e diskut mesit. Hipoteza mjekësore 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Thyerje e brendshme e diskut. Problemet e prolapsit të diskut mbi 50 vjet. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Koha e postimit: Dhjetor-13-2024