Faleminderit që vizituat Nature.com. Versioni i shfletuesit që po përdorni ka mbështetje të kufizuar CSS. Për rezultate më të mira, ne ju rekomandojmë të përdorni një version më të ri të shfletuesit tuaj (ose të çaktivizoni Modalitetin e Përputhshmërisë në Internet Explorer). Ndërkohë, për të siguruar mbështetje të vazhdueshme, ne po e shfaqim faqen pa stilizim ose JavaScript.
Rritja mikrobike në plagë shpesh manifestohet si biofilm, të cilët ndërhyjnë në shërimin dhe janë të vështira për t'u zhdukur. Fashat e reja të argjendit pretendojnë se luftojnë infeksionet e plagëve, por efikasiteti i tyre antibiofilm dhe efektet shëruese të pavarura nga infeksioni janë përgjithësisht të panjohura. Duke përdorur modele biofilmi in vitro dhe in vivo të Staphylococcus aureus dhe Pseudomonas aeruginosa, ne raportojmë efektivitetin e fashave gjeneruese të jonit Ag1+; fashat Ag1+ që përmbajnë acid etilendiaminetetraacetik dhe klorur benzetoniumi (Ag1+/EDTA/BC), dhe fashat që përmbajnë nitrat argjendi (kripëra oksi Ag), të cilat prodhojnë jone Ag1+, Ag2+ dhe Ag3+ për të luftuar biofilmin e plagës dhe efektin e tij në shërim. Fashat Ag1+ kishin efekte minimale në biofilmin e plagës in vitro dhe në minj (C57BL/6j). Në të kundërt, kripërat e oksigjenuara të Ag dhe fashat Ag1+/EDTA/BC ulën ndjeshëm numrin e baktereve të qëndrueshme në biofilm in vitro dhe demonstruan një reduktim të ndjeshëm të përbërësve bakterialë dhe EPS në biofilmet e plagëve të miut. Këto fasha kishin efekte të ndryshme në shërimin e plagëve të infektuara me biofilm dhe jo të infektuara me biofilm, me fashat e oksigjenuara me kripë që kishin efekte më të dobishme në riepitelizimin, madhësinë e plagës dhe inflamacionin krahasuar me trajtimet kontrolluese dhe fashat e tjera me argjend. Vetitë e ndryshme fiziko-kimike të fashave me argjend mund të kenë efekte të ndryshme në biofilmin e plagës dhe shërimin, dhe kjo duhet të merret në konsideratë kur zgjidhet një fashë për trajtimin e plagëve të infektuara me biofilm.
Plagët kronike përkufizohen si "plagë që nuk arrijnë të përparojnë nëpër fazat normale të shërimit në një mënyrë të rregullt dhe në kohë" 1. Plagët kronike krijojnë një barrë psikologjike, sociale dhe ekonomike për pacientët dhe sistemin e kujdesit shëndetësor. Shpenzimet vjetore të NHS për trajtimin e plagëve dhe sëmundjeve shoqëruese vlerësohen në 8.3 miliardë paund në vitet 2017–182. Plagët kronike janë gjithashtu aktualisht një problem urgjent në Shtetet e Bashkuara, me Medicare që vlerëson koston vjetore të trajtimit të pacientëve me plagë në 28.1–96.8 miliardë dollarë 3.
Infeksioni është një faktor kryesor që parandalon shërimin e plagëve. Infeksionet shpesh manifestohen si biofilme, të cilat janë të pranishme në 78% të plagëve kronike që nuk shërohen. Biofilmet formohen kur mikroorganizmat ngjiten në mënyrë të pakthyeshme në sipërfaqe, siç janë sipërfaqet e plagëve, dhe mund të grumbullohen për të formuar komunitete që prodhojnë polimer jashtëqelizor (EPS). Biofilmi i plagës shoqërohet me një përgjigje inflamatore në rritje që çon në dëmtim të indeve, i cili mund të vonojë ose parandalojë shërimin4. Rritja e dëmtimit të indeve mund të jetë pjesërisht për shkak të aktivitetit në rritje të metaloproteinazave të matricës, kolagenazës, elastazës dhe specieve reaktive të oksigjenit5. Për më tepër, qelizat inflamatore dhe biofilmet janë vetë konsumatorë të lartë të oksigjenit dhe për këtë arsye mund të shkaktojnë hipoksi lokale të indeve, duke i varfëruar qelizat nga oksigjeni jetësor i nevojshëm për riparim efektiv të indeve6.
Biofilmet e pjekura janë shumë rezistente ndaj agjentëve antimikrobikë, duke kërkuar strategji agresive për të kontrolluar infeksionet e biofilmit, të tilla si trajtimi mekanik i ndjekur nga trajtimi efektiv antimikrobik. Meqenëse biofilmet mund të rigjenerohen me shpejtësi, antimikrobikët efektivë mund të zvogëlojnë rrezikun e riformimit pas debridimit kirurgjikal7.
Argjendi përdoret gjithnjë e më shumë në fashat antimikrobike dhe shpesh përdoret si një trajtim i linjës së parë për plagët e infektuara kronike. Ekzistojnë shumë fasha argjendi të disponueshme në treg, secila prej të cilave përmban një përbërje, përqendrim dhe matricë bazë të ndryshme argjendi. Përparimet në shiritat e krahëve prej argjendi kanë çuar në zhvillimin e shiritave të rinj të krahëve prej argjendi. Forma metalike e argjendit (Ag0) është inerte; Për të arritur efektivitet antimikrobik, duhet të humbasë një elektron për të formuar argjend jonik (Ag1+). Fashat tradicionale të argjendit përmbajnë komponime argjendi ose argjend metalik të cilat, kur ekspozohen ndaj lëngut, zbërthehen për të formuar jone Ag1+. Këto jone Ag1+ reagojnë me qelizën bakteriale, duke hequr elektronet nga përbërësit strukturorë ose proceset kritike të nevojshme për mbijetesë. Teknologjia e patentuar ka çuar në zhvillimin e një komponimi të ri argjendi, kripërat e oksigjenit Ag (nitrat argjendi, Ag7NO11), i cili përfshihet në fashat e plagëve. Ndryshe nga argjendi tradicional, zbërthimi i kripërave që përmbajnë oksigjen prodhon gjendje argjendi me valencë më të lartë (Ag1+, Ag2+ dhe Ag3+). Studimet in vitro kanë treguar se përqendrimet e ulëta të kripërave të argjendit të oksigjenuar janë më efektive sesa argjendi me një jon të vetëm (Ag1+) kundër baktereve patogjene si Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus dhe Escherichia coli8,9. Një lloj tjetër i ri i fashave të argjendit përfshin përbërës shtesë, përkatësisht acid etilendiaminetetraacetik (EDTA) dhe klorur benzetoniumi (BC), të cilët raportohet se synojnë EPS-në e biofilmit dhe në këtë mënyrë rrisin depërtimin e argjendit në biofilm. Këto teknologji të reja të argjendit ofrojnë mënyra të reja për të synuar biofilmet e plagëve. Megjithatë, ndikimi i këtyre antimikrobikëve në mjedisin e plagës dhe shërimin e pavarur nga infeksioni është i rëndësishëm për t'u siguruar që ato të mos krijojnë një mjedis të pafavorshëm të plagës ose të vonojnë shërimin. Shqetësime në lidhje me citotoksicitetin e argjendit in vitro janë raportuar me disa fasha argjendi10,11. Megjithatë, citotoksiciteti in vitro ende nuk është përkthyer në toksicitet in vivo, dhe disa fasha Ag1+ kanë demonstruar një profil të mirë sigurie12.
Këtu, ne hetuam efektivitetin e fashave karboksimetilcelulozë që përmbajnë formulime të reja argjendi kundër biofilmit të plagëve in vitro dhe in vivo. Përveç kësaj, u vlerësuan efektet e këtyre fashave në përgjigjet imune dhe shërimin pavarësisht nga infeksioni.
Të gjitha fashat e përdorura ishin të disponueshme komercialisht. Fasha me fibra xheli 3M Kerracel (3M, Knutsford, Mbretëria e Bashkuar) është një fashë me fibra xheli 100% karboksimetilcelulozë (CMC) jo-antimikrobike që u përdor si fashë kontrolli në këtë studim. U vlerësuan tre fasha argjendi CMC antimikrobike, përkatësisht fasha 3M Kerracel Ag (3M, Knutsford, Mbretëria e Bashkuar), e cila përmban 1.7% në peshë kripë argjendi të oksigjenuar (Ag7NO11) në jone argjendi me valencë më të lartë (Ag1+, Ag2+ dhe Ag3+). Gjatë dekompozimit të Ag7NO11, formohen jone Ag1+, Ag2+ dhe Ag3+ në një raport prej 1:2:4. Fasha Aquacel Ag Extra që përmban 1.2% klorur argjendi (Ag1+) (ConvaTec, Deeside, Mbretëria e Bashkuar) 13 dhe fasha Aquacel Ag + Extra që përmban 1.2% klorur argjendi (Ag1+), EDTA dhe klorur benzetoniumi (ConvaTec, Deeside, Mbretëria e Bashkuar) 14.
Llojet e përdorura në këtë studim ishin Pseudomonas aeruginosa NCTC 10781 (Shëndeti Publik i Anglisë, Salisbury) dhe Staphylococcus aureus NCTC 6571 (Shëndeti Publik i Anglisë, Salisbury).
Bakteret u rritën gjatë natës në lëngun Muller-Hinton (Oxoid, Altrincham, Mbretëria e Bashkuar). Kultura e kultivuar gjatë natës u hollua më pas 1:100 në lëngun Mueller-Hinton dhe 200 µl u vendosën në membrana sterile ciklopore Whatman 0.2 µm (Whatman plc, Maidstone, Mbretëria e Bashkuar) në pllaka agar Mueller-Hinton (Sigma-Aldrich Company Ltd, Kent, Britania e Madhe). Formimi i biofilmit kolonial në 37°C për 24 orë. Këta biofilma kolonialë u testuan për tkurrje logaritmike.
Priteni fashën në copa katrore prej 3 cm2 dhe lagni paraprakisht me ujë steril të dejonizuar. Vendosni fashën mbi biofilmin e kolonisë në pllakën e agarit. Çdo 24 ha biofilm u hoq dhe bakteret e qëndrueshme brenda biofilmit (CFU/ml) u përcaktuan me hollim serik (10−1 deri në 10−7) në lëng neutralizimi Day-Angle (Merck-Millipore). Pas 24 orësh inkubimi në 37°C, numërimi standard i pllakave u krye në pllaka agar Mueller-Hinton. Çdo trajtim dhe pikë kohore u krye në trefish dhe numërimi i pllakave u përsërit për çdo hollim.
Lëkura e barkut të derrit merret nga derrat femra të racës Large White brenda 15 minutave nga therja, në përputhje me standardet e eksportit të Bashkimit Evropian. Lëkura u rrua dhe u pastrua me peceta alkooli, pastaj u ngri në -80°C për 24 orë për ta devitalizuar lëkurën. Pas shkrirjes, copa lëkure prej 1 cm2 u lanë tre herë me PBS, 0.6% hipoklorit natriumi dhe 70% etanol për 20 minuta çdo herë. Para heqjes së epidermës, hiqni çdo etanol të mbetur duke e larë 3 herë në PBS steril. Lëkura u kultivua në një pllakë me 6 puseta me një membranë najloni me trashësi 0.45 μm (Merck-Millipore) sipër dhe 3 jastëkë thithës (Merck-Millipore) që përmbanin 3 ml serum fetal të gjedhit (Sigma) të plotësuar me 10% Dulbecco's modified Eagle Medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium – Aldrich Ltd.).
Biofilmet koloniale u rritën siç përshkruhet për studimet e ekspozimit ndaj biofilmit. Pas kultivimit të biofilmit në membranë për 72 orë, biofilmi u aplikua në sipërfaqen e lëkurës duke përdorur një lak steril inokulimi dhe membrana u hoq. Biofilmi u inkubua më pas në dermën e derrit për 24 orë të tjera në 37°C për të lejuar që biofilmi të piqet dhe të ngjitet në lëkurën e derrit. Pasi biofilmi ishte pjekur dhe ngjitur, një fashë 1.5 cm2, e lagur paraprakisht me ujë të distiluar steril, u aplikua direkt në sipërfaqen e lëkurës dhe u inkubua në 37°C për 24 orë. Bakteret e qëndrueshme u vizualizuan duke ngjyrosur duke aplikuar në mënyrë uniforme reagentin e qëndrueshmërisë së qelizave PrestoBlue (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, UK) në sipërfaqen apikale të secilit eksplant dhe duke e inkubuar atë për 5 minuta. Përdorni kamerën dixhitale Leica DFC425 për të kapur menjëherë imazhe në mikroskopin Leica MZ8. Zonat e ngjyrosura rozë u përcaktuan në mënyrë sasiore duke përdorur versionin 10 të softuerit Image Pro (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD Image-Pro (mediacy.com)). Mikroskopia elektronike skanuese u krye siç përshkruhet më poshtë.
Bakteret e rritura gjatë natës u holluan 1:100 në lëngun Mueller-Hinton. 200 μl kulturë u shtuan në membranën sterile ciklopore Whatman 0.2 μm (Whatman, Maidstone, UK) dhe u vendosën në agar Mueller-Hinton. Pllakat e biofilmit u inkubuan në 37°C për 72 orë për të lejuar formimin e biofilmit të pjekur.
Pas 3 ditësh maturimi të biofilmit, një fashë katrore prej 3 cm2 u vendos direkt mbi biofilm dhe u inkubua në 37°C për 24 orë. Pas heqjes së fashës nga sipërfaqja e biofilmit, 1 ml Reagent PrestoBlue Cell Viability (Invitrogen, Waltham, MA) u shtua në sipërfaqen e secilit biofilm për 20 sekonda. Sipërfaqet u thanë përpara se ndryshimet e ngjyrës të regjistroheshin duke përdorur një aparat fotografik dixhital Nikon D2300 (Nikon UK Ltd., Kingston, UK).
Përgatitni kulturat gjatë natës në agar Mueller-Hinton, transferoni kolonitë individuale në 10 ml lëng Mueller-Hinton dhe inkubojini në një tundës në 37°C (100 rpm). Pas inkubimit gjatë natës, kultura u hollua 1:100 në lëng Mueller-Hinton dhe 300 µl u spërkatën në membranën rrethore ciklopore Whatman 0.2 µm (Whatman International, Maidstone, UK) në agar Mueller-Hinton dhe u inkubua në 37°C brenda 72 orëve. Biofilmi i pjekur u aplikua në plagë siç përshkruhet më poshtë.
I gjithë puna me kafshët u krye në Universitetin e Mançesterit sipas një licence projekti të miratuar nga Zyra e Mirëqenies së Kafshëve dhe Rishikimit Etik (P8721BD27) dhe në përputhje me udhëzimet e publikuara nga Ministria e Brendshme sipas ASPA-së së rishikuar të vitit 2012. Të gjithë autorët iu përmbajtën udhëzimeve të mbërritjes. Minjtë tetëjavësh C57BL/6j (Envigo, Oxon, Mbretëria e Bashkuar) u përdorën për të gjitha studimet in vivo. Minjtë u anestezuan me izofluran (Piramal Critical Care Ltd, West Drayton, Mbretëria e Bashkuar) dhe sipërfaqet e tyre dorsale u rruajtën dhe u pastruan. Çdo miu iu dha më pas një plagë ekscizive 2 × 6 mm duke përdorur një shpues biopsie Stiefel (Schuco International, Hertfordshire, Mbretëria e Bashkuar). Për plagët e infektuara me biofilm, aplikoni biofilm kolonial 72-orësh të rritur në membranë siç përshkruhet më sipër në shtresën dermale të plagës duke përdorur një lak inokulimi steril menjëherë pas lëndimit dhe hidheni membranën. Një centimetër katror i fashës laget paraprakisht me ujë steril për të ruajtur një mjedis të lagësht të plagës. Fashat u vendosën direkt në secilën plagë dhe u mbuluan me film 3M Tegaderm (3M, Bracknell, UK) dhe ngjitës të lëngshëm Mastisol (Eloquest Healthcare, Ferndale, MI) të aplikuar rreth skajeve për të siguruar ngjitje shtesë. Buprenorfina (Animalcare, York, UK) u administrua në një përqendrim prej 0.1 mg/kg si analgjezik. Minjtë u eliminuan tre ditë pas lëndimit duke përdorur metodën e Shtojcës 1 dhe hiqen, ndahen përgjysmë dhe ruhen në zonën e plagës sipas nevojës.
Ngjyrosja me hematoksilinë (ThermoFisher Scientific) dhe eozinë (ThermoFisher Scientific) u krye sipas protokollit të prodhuesit. Sipërfaqja e plagës dhe riepitelizimi u përcaktuan duke përdorur softuerin Image Pro versioni 10 (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD).
Seksionet e indeve u de-dyshuan në ksilen (ThermoFisher Scientific, Loughborough, UK), u rehidratuan me etanol të graduar 100–50% dhe u zhytën për pak kohë në ujë të deionizuar (ThermoFisher Scientific). Imunohistokimia u krye duke përdorur kitin VectaStain Elite ABC PK-6104 (Vector Laboratories, Burlingame, CA) sipas protokollit të prodhuesit. Antitrupat primarë ndaj neutrofileve NIMP-R14 (Thermofisher Scientific) dhe makrofagëve Ms CD107b Pure M3/84 (BD Biosciences, Wokingham, UK) u holluan 1:100 në tretësirë bllokuese dhe u shtuan në sipërfaqen e prerë, të ndjekura nga 2 antitrupa Anti-, VectaStain ABC dhe kiti i substratit Vector Nova Red Peroxidase (HRP) (Vector Laboratories, Burlingame, CA) dhe u kundërngjyrosën me hematoksilinë. Imazhet u morën duke përdorur një mikroskop Olympus BX43 dhe një aparat fotografik dixhital Olympus DP73 (Olympus, Southend-on-Sea, Mbretëria e Bashkuar).
Mostrat e lëkurës u fiksuan në 2.5% glutaraldehidë dhe 4% formaldehidë në 0.1 M HEPES (pH 7.4) për 24 orë në 4°C. Mostrat u dehidratuan duke përdorur etanol të graduar dhe u thanë në CO2 duke përdorur një tharëse të pikës kritike Quorum K850 (Quorum Technologies Ltd, Loughton, UK) dhe u veshën me spërkatje me aliazh ari-paladium duke përdorur një sistem mini spërkatjeje/shkarkimi me shkëlqim Quorum SC7620. Mostrat u imazhuan duke përdorur një mikroskop elektronik skanues FEI Quanta 250 (ThermoFisher Scientific) për të vizualizuar pikën qendrore të plagës.
Joduri Toto-1 (2 μM) u aplikua në sipërfaqen e plagës së prerë të miut dhe u inkubua për 5 minuta në 37 °C (ThermoFisher Scientific) dhe u trajtua me Syto-60 (10 μM) në 37 °C (ThermoFisher Scientific). Imazhet 15-minutëshe Z-stack u krijuan duke përdorur një Leica TCS SP8.
Të dhënat biologjike dhe teknike të përsëritura u tabeluan dhe u analizuan duke përdorur programin Graphpad Prism V9 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Analiza njëkahëshe e variancës me krahasime të shumëfishta duke përdorur testin post hoc të Dunnett u përdor për të testuar ndryshimet midis secilit trajtim dhe fashës së kontrollit jo-antimikrobik. Një vlerë p <0.05 u konsiderua si e rëndësishme.
Efektiviteti i fashave fibroze me xhel argjendi u vlerësua fillimisht kundër kolonive të biofilmit të Staphylococcus aureus dhe Pseudomonas aeruginosa in vitro. Fashat e argjendit përmbajnë formula të ndryshme të argjendit: fashat tradicionale të argjendit prodhojnë jone Ag1+; fashat e argjendit, të cilat mund të prodhojnë jone Ag1+ pas shtimit të EDTA/BC, mund të shkatërrojnë matricën e biofilmit dhe t'i ekspozojnë bakteret ndaj argjendit nën efektin antibakterial të joneve të argjendit15 dhe fashave që përmbajnë kripëra Ag të oksigjenuara që prodhojnë jone Ag1+, Ag2+ dhe Ag3+. Efektiviteti i tij u krahasua me një fashë kontrolli jo-antimikrobike të bërë nga fibra xhelatinoze. Bakteret e mbetura të qëndrueshme brenda biofilmit u vlerësuan çdo 24 orë për 8 ditë (Figura 1). Në ditën 5, biofilmi u rinokolua me 3.85 × 105S. Staphylococcus aureus ose 1.22×105P. aeruginosa për të vlerësuar rikuperimin e biofilmit. Krahasuar me fashat e kontrollit jo-antimikrobik, fashat Ag1+ kishin efekt minimal në qëndrueshmërinë bakteriale në biofilmat e Staphylococcus aureus dhe Pseudomonas aeruginosa gjatë 5 ditëve. Në të kundërt, fashat që përmbanin Ag të oksigjenuar dhe kripëra Ag1+ + EDTA/BC ishin efektive në vrasjen e baktereve brenda biofilmit brenda 5 ditëve. Pas inokulimit të përsëritur me baktere planktonike në ditën e 5-të, nuk u vu re asnjë rivendosje e biofilmit (Fig. 1).
Përcaktimi sasior i baktereve të qëndrueshme në biofilmet e Staphylococcus aureus dhe Pseudomonas aeruginosa pas trajtimit me fasha argjendi. Kolonitë e biofilmit të Staphylococcus aureus dhe Pseudomonas aeruginosa u trajtuan me fasha argjendi ose fasha kontrolli jo-antimikrobike, dhe numri i baktereve të qëndrueshme të mbetura u përcaktua çdo 24 orë. Pas 5 ditësh, biofilmi u rinokolua me 3.85×105S. Staphylococcus aureus ose 1.22×105P. Kolonitë e bakterioplanktonit Pseudomonas aeruginosa u formuan individualisht për të vlerësuar rikuperimin e biofilmit. Grafikët tregojnë gabimin standard mesatar +/-.
Për të vizualizuar efektin e fashave të argjendta në qëndrueshmërinë e biofilmit, fashat u aplikuan në biofilma të pjekur të rritur në lëkurën e derrit ex vivo. Pas 24 orësh, fasha hiqet dhe biofilmi ngjyroset me një ngjyrues reaktiv blu, i cili metabolizohet nga bakteret e gjalla në një ngjyrë rozë. Biofilmat e trajtuar me fashat e kontrollit ishin rozë, duke treguar praninë e baktereve të qëndrueshme brenda biofilmit (Figura 2A). Në të kundërt, biofilmi i trajtuar me fashën Ag oxysols ishte kryesisht blu, duke treguar se bakteret e mbetura në sipërfaqen e lëkurës së derrit ishin baktere jo të qëndrueshme (Figura 2B). Ngjyrosje e përzier blu dhe rozë u vu re në biofilmat e trajtuar me fasha që përmbanin Ag1+, duke treguar praninë e baktereve të qëndrueshme dhe jo të qëndrueshme brenda biofilmit (Figura 2C), ndërsa fashat EDTA/BC që përmbanin Ag1+ ishin kryesisht blu me disa njolla rozë, duke treguar zonat që nuk preken nga fasha e argjendit (Figura 2D). Përcaktimi sasior i zonave aktive (rozë) dhe joaktive (blu) tregoi se pjesa e kontrollit ishte 75% aktive (Figura 2E). Fashat Ag1+ + EDTA/BC performuan në mënyrë të ngjashme me fashat me kripë Ag të oksigjenuara, me shkallë mbijetese prej 13% dhe 14%, përkatësisht. Fasha Ag1+ gjithashtu uli qëndrueshmërinë bakteriale me 21%. Këto biofilma u vunë re më pas duke përdorur mikroskopinë elektronike skanuese (SEM). Pas trajtimit me fashën kontrolluese dhe fashën Ag1+, u vu re një shtresë Pseudomonas aeruginosa që mbulonte lëkurën e derrit (Figura 2F, H), ndërsa pas trajtimit me fashën Ag1+, u gjetën pak qeliza bakteriale dhe pak qeliza bakteriale poshtë saj. Fibrat e kolagjenit mund të konsiderohen si struktura indore e lëkurës së derrit (Figura 2G). Pas trajtimit me fashën Ag1+ + EDTA/BC, pllakat bakteriale dhe pllakat e fibrave të kolagjenit poshtë tyre ishin të dukshme (Figura 2I).
Vizualizimi i biofilmit Pseudomonas aeruginosa pas trajtimit me fashë argjendi. (A–D) Qëndrueshmëria bakteriale në biofilmet Pseudomonas aeruginosa të rritura në lëkurën e derrit u vizualizua duke përdorur ngjyrën e qëndrueshmërisë PrestoBlue 24 orë pas trajtimit me fasha argjendi ose fasha kontrolli jo-antimikrobike. Bakteret e gjalla janë rozë, bakteret jo-qëndrueshme dhe lëkura e derrit janë blu. (E) Përcaktimi sasior i biofilmeve Pseudomonas aeruginosa të rritura në lëkurën e derrit (njollë rozë) duke përdorur mikroskopinë elektronike skanuese Image Pro versioni 10 (FI) dhe të trajtuara me një fashë argjendi ose një fashë kontrolli jo-antimikrobike për 24 orë. Shiriti i shkallës SEM = 5 µm. (J–M) Biofilmet koloniale u rritën në filtra dhe u ngjyrosën me ngjyrë reaktive PrestoBlue pas 24 orësh inkubimi me fasha argjendi.
Për të përcaktuar nëse kontakti i ngushtë midis fashave dhe biofilmeve ndikonte në efektivitetin e tyre, biofilmet koloniale të vendosura në një sipërfaqe të sheshtë u trajtuan me fashat për 24 orë dhe më pas u ngjyrosën me ngjyra reaktive. Biofilmi i patrajtuar kishte ngjyrë rozë të errët (Figura 2J). Në dallim nga biofilmet e trajtuara me fasha që përmbanin kripëra të oksigjenuara të Ag (Figura 2K), biofilmet e trajtuara me fasha që përmbanin Ag1+ ose Ag1+ + EDTA/BC treguan shirita me ngjyrosje rozë (Figura 2L,M). Ky ngjyrosje rozë tregon praninë e baktereve të qëndrueshme dhe shoqërohet me zonën e qepjes brenda fashës. Këto zona të qepura krijojnë hapësira të vdekura që lejojnë bakteret brenda biofilmit të mbijetojnë.
Për të vlerësuar efektivitetin e fashave të argjendit in vivo, plagët e prera me trashësi të plotë të minjve të infektuar me biofilma të pjekur të S. aureus dhe P. aeruginosa u trajtuan me fasha kontrolli jo-antimikrobike ose me fasha argjendi. Pas 3 ditësh trajtimi, analiza makroskopike e imazhit tregoi madhësi më të vogla të plagëve kur trajtoheshin me fasha të oksigjenuara me kripë krahasuar me fashat e kontrollit jo-antimikrobike dhe fashat e tjera të argjendit (Figura 3A-H). Për të konfirmuar këto vëzhgime, plagët u mblodhën dhe zona e plagës dhe riepitelizimi u përcaktuan në seksionet e indeve të ngjyrosura me hematoksilinë dhe eozinë duke përdorur versionin 10 të softuerit image pro (Figura 3I-L).
Efekti i fashave të argjendit në sipërfaqen e plagës dhe riepitelizimi i plagëve të infektuara me biofilma. (A–H) Qeliza të vogla të infektuara me biofilma të Pseudomonas aeruginosa (A–D) dhe Staphylococcus aureus (E–H) pas tre ditësh trajtimi me një fashë kontrolli jo-antimikrobike, një fashë me kripë Ag të oksigjenuar, një fashë Ag1+ dhe një fashë Ag1+. Imazhe makroskopike përfaqësuese. Plagë të minjve me fashë Ag1+ + EDTA/BC. (IL) Infeksion përfaqësues i Pseudomonas aeruginosa, seksione histologjike të ngjyrosura me hematoksilinë dhe eozinë, të përdorura për të përcaktuar sasinë e sipërfaqes së plagës dhe rigjenerimin epitelial. Kuantifikimi i sipërfaqes së plagës (M, O) dhe përqindja e riepitelizimit (N, P) të plagëve të infektuara me biofilma Pseudomonas aeruginosa (M, N) dhe Staphylococcus aureus (O, P) (për grup trajtimi n = 12). Grafikët tregojnë gabimin standard mesatar +/-. * do të thotë p = < 0.05 ** do të thotë p = < 0.01; Shkalla makroskopike = 2.5 mm, shkalla histologjike = 500 µm.
Përcaktimi sasior i sipërfaqes së plagës në plagët e infektuara me biofilm Pseudomonas aeruginosa (Figura 3M) tregoi se plagët e trajtuara me kripëra oksi të Ag kishin një madhësi mesatare të plagës prej 2.5 mm2, ndërsa fasha e kontrollit jo-antimikrobik kishte një madhësi mesatare të plagës prej 3.1 mm2, gjë që nuk është e vërtetë. arriti rëndësi statistikore (Figura 3M). p = 0.423). Plagët e trajtuara me Ag1+ ose Ag1+ + EDTA/BC nuk treguan reduktim të sipërfaqes së plagës (përkatësisht 3.1 mm2 dhe 3.6 mm2). Trajtimi me fashë të oksigjenuar me kripë Ag nxiti riepitelizimin në një masë më të madhe sesa fasha e kontrollit jo-antimikrobik (përkatësisht 34% dhe 15%; p = 0.029) dhe Ag1+ ose Ag1+ + EDTA/BC (10% dhe 11%) (Figura 3N). . , përkatësisht).
Trende të ngjashme në sipërfaqen e plagës dhe rigjenerimin epitelial u vunë re në plagët e infektuara me biofilm të S. aureus (Figura 3O). Fashat që përmbanin kripëra argjendi të oksigjenuara e ulën sipërfaqen e plagës (2.0 mm2) me 23% krahasuar me fashën e kontrollit jo-antimikrobik (2.6 mm2), megjithëse ky reduktim nuk ishte i rëndësishëm (p = 0.304) (Fig. 3O). Përveç kësaj, sipërfaqja e plagës në grupin e trajtimit Ag1+ u ul pak (2.4 mm2), ndërsa plaga e trajtuar me fashën Ag1+ + EDTA/BC nuk e zvogëloi sipërfaqen e plagës (2.9 mm2). Kripërat e oksigjenit të Ag gjithashtu nxitën riepitelizimin e plagëve të infektuara me biofilm të S. aureus (31%) në një masë më të madhe sesa ato të trajtuara me fasha kontrolli jo-antimikrobik (12%, p = 0.003) (Figura 3P). Fasha Ag1+ (16%, p = 0.903) dhe fasha Ag+1 + EDTA/BC (14%, p = 0.965) treguan nivele të rigjenerimit epitelial të ngjashme me grupin e kontrollit.
Për të vizualizuar efektin e fashave të argjendit në matricën e biofilmit, u krye ngjyrosja me jodur Toto 1 dhe Syto 60 (Fig. 4). Joduri Toto 1 është një ngjyrues i papërshkueshëm nga qelizat që mund të përdoret për të vizualizuar me saktësi acidet nukleike jashtëqelizore, të cilat janë të bollshme në EPS të biofilmeve. Syto 60 është një ngjyrues i përshkueshëm nga qelizat që përdoret si kundërngjyrues16. Vëzhgimet e jodurit Toto 1 dhe Syto 60 në plagët e inokuluara me biofilme të Pseudomonas aeruginosa (Figura 4A-D) dhe Staphylococcus aureus (Figura 4I-L) treguan se pas 3 ditësh trajtimi me fashë, EPS në biofilm u zvogëlua ndjeshëm. Fashat Ag1+ pa përbërës shtesë të antibiofilmit ulën ndjeshëm ADN-në pa qeliza në plagët e inokuluara me Pseudomonas aeruginosa, por ishin më pak efektive në plagët e inokuluara me Staphylococcus aureus.
Imazhe in vivo të biofilmit të plagës pas 3 ditësh trajtimi me fasha kontrolli ose argjendi. Imazhe konfokale të Pseudomonas aeruginosa (A–D) dhe Staphylococcus aureus (I–L) të ngjyrosura me Toto 1 (jeshile) për të vizualizuar acidet nukleike jashtëqelizore, një përbërës i polimereve të biofilmit jashtëqelizor. Për të ngjyrosur acidet nukleike brendaqelizore, përdorni Syto 60 (të kuqe). acide. P. Mikroskopia elektronike skanuese e plagëve të infektuara me biofilme Pseudomonas aeruginosa (E–H) dhe Staphylococcus aureus (M–P) pas 3 ditësh trajtimi me fasha kontrolli dhe argjendi. Shiriti i shkallës SEM = 5 µm. Shiriti i shkallës së imazhit konfokal = 50 µm.
Mikroskopia elektronike skanuese tregoi se minjtë e inokuluar me koloni biofilmi të Pseudomonas aeruginosa (Figura 4E-H) dhe Staphylococcus aureus (Figura 4M-P) kishin dukshëm më pak baktere në plagët e tyre pas 3 ditësh trajtimi me të gjitha fashat prej argjendi.
Për të vlerësuar efektin e fashave të argjendit në inflamacionin e plagëve te minjtë e infektuar me biofilm, seksionet e plagëve të infektuara me biofilm të trajtuara me fasha kontrolli ose argjendi për 3 ditë u ngjyrosën imunohistokimikisht duke përdorur antitrupa specifikë për neutrofilet dhe makrofagët. Përcaktimi sasior i neutrofileve dhe makrofagëve nga brenda. ind granulacioni. Figura 5). Të gjitha fashat e argjendit ulën numrin e neutrofileve dhe makrofagëve në plagët e infektuara me Pseudomonas aeruginosa krahasuar me fashat e kontrollit jo-antimikrobik pas tre ditësh trajtimi. Megjithatë, trajtimi me fashën e oksigjenuar me kripë argjendi rezultoi në një reduktim më të madh të neutrofileve (p = <0.0001) dhe makrofagëve (p = <0.0001) krahasuar me fashat e tjera të argjendit të testuara (Figura 5I,J). Edhe pse Ag1+ + EDTA/BC pati një efekt më të madh në biofilmin e plagës, ajo uli nivelet e neutrofileve dhe makrofagëve në një masë më të vogël se fasha Ag1+. Plagë të moderuara të infektuara me biofilm të S. aureus u vunë re gjithashtu pas veshjes me oksizole Ag (p = <0.0001), Ag1+ (p = 0.0008) dhe Ag1++ EDTA/BC (p = 0.0043) krahasuar me kontrollin. Trende të ngjashme vërehen për neutropeninë. Megjithatë, vetëm fasha e oksigjenuar me kripë Ag tregoi një ulje të konsiderueshme të numrit të makrofagëve në indin granulacional krahasuar me kontrollin në plagët e infektuara me biofilm të S. aureus (p = 0.0339) (Figura 5L).
Neutrofilet dhe makrofagët u përcaktuan sasiore në plagët e infektuara me biofilma Pseudomonas aeruginosa dhe Staphylococcus aureus pas 3 ditësh trajtimi me kontroll jo-antimikrobik ose fasha argjendi. Neutrofilet (AD) dhe makrofagët (EH) u përcaktuan sasiore në seksione indesh të ngjyrosura me antitrupa specifikë për neutrofilet ose makrofagët. Përcaktimi sasior i neutrofileve (I dhe K) dhe makrofagëve (J dhe L) në plagët e infektuara me biofilma Pseudomonas aeruginosa (I dhe J) dhe Staphylococcus aureus (K & L). N = 12 për grup. Grafikët tregojnë gabimin standard mesatar +/-, vlerat e rëndësisë krahasuar me fashën e kontrollit jo-antibakterial, * do të thotë p = < 0.05, ** do të thotë p = < 0.01; *** do të thotë p = < 0.001; tregon p = <0.0001).
Më pas vlerësuam efektin e fashave të argjendit në shërimin e pavarur nga infeksioni. Plagët e painfektuara me heqje u trajtuan me një fashë kontrolli jo-antimikrobike ose me një fashë argjendi për 3 ditë (Figura 6). Ndër fashat e argjendit të testuara, vetëm plagët e trajtuara me fashën e kripës së oksigjenuar dukeshin më të vogla në imazhet makroskopike sesa plagët e trajtuara me kontrollin (Figura 6A-D). Përcaktimi sasior i sipërfaqes së plagës duke përdorur analizën histologjike tregoi se sipërfaqja mesatare e plagës pas trajtimit me fashën Ag oxysols ishte 2.35 mm2 krahasuar me 2.96 mm2 për plagët e trajtuara me grupin e kontrollit, por kjo ndryshim nuk arriti rëndësi statistikore (p = 0.488) (Fig. 6I). Në të kundërt, nuk u vu re asnjë zvogëlim i sipërfaqes së plagës pas trajtimit me fasha Ag1+ (3.38 mm2, p = 0.757) ose Ag1+ + EDTA/BC (4.18 mm2, p = 0.054) krahasuar me grupin e kontrollit. Një rritje e rigjenerimit epitelial u vu re me fashën Ag oxysol krahasuar me grupin e kontrollit (përkatësisht 30% kundrejt 22%), megjithëse kjo nuk arriti rëndësi (p = 0.067), kjo është mjaft domethënëse dhe konfirmon rezultatet e mëparshme. Një fashë me oksisol nxit riepitelizimin. -Epitelizimi i plagëve të painfektuara17. Në të kundërt, trajtimi me fasha Ag1+ ose Ag1+ + EDTA/BC nuk pati efekt ose tregoi një ulje të riepitelizimit krahasuar me grupin e kontrollit.
Efekti i fashës së plagëve me argjend në shërimin e plagëve te minjtë e painfektuar me rezeksion të plotë. (AD) Imazhe makroskopike përfaqësuese të plagëve pas tre ditësh trajtimi me një fashë kontrolli jo-antimikrobike dhe një fashë argjendi. (EH) Seksione përfaqësuese të plagëve të ngjyrosura me hematoksilinë dhe eozinë. Kuantifikimi i sipërfaqes së plagës (I) dhe përqindja e riepitelizimit (J) u llogaritën nga seksionet histologjike në pikën e mesit të plagës duke përdorur softuerin e analizës së imazhit (n = 11–12 për grup trajtimi). Grafikët tregojnë gabimin standard mesatar +/-. * do të thotë p = <0.05.
Argjendi ka një histori të gjatë përdorimi si një terapi antimikrobike në shërimin e plagëve, por formulimet dhe metodat e ndryshme të administrimit mund të rezultojnë në ndryshime në efikasitetin antimikrobik 18. Për më tepër, vetitë antibiofilmike të sistemeve specifike të administrimit të argjendit nuk janë kuptuar plotësisht. Edhe pse përgjigja imune e strehuesit është relativisht efektive kundër baktereve planktonike, ajo në përgjithësi është më pak efektive kundër biofilmeve 19. Bakteret planktonike fagocitohen lehtësisht nga makrofagët, por brenda biofilmeve, qelizat e agreguara paraqesin probleme shtesë duke kufizuar përgjigjen e strehuesit në masën që qelizat imune mund t'i nënshtrohen apoptozës dhe të lëshojnë faktorë proinflamatorë për të rritur përgjigjen imune 20. Është vërejtur se disa leukocite mund të depërtojnë në biofilme 21, por nuk janë në gjendje të fagocitojnë bakteret pasi kjo mbrojtje të jetë kompromentuar 22. Një qasje holistike duhet të përdoret për të mbështetur përgjigjen imune të strehuesit kundër infeksionit të biofilmit të plagës. Debridimi i plagëve mund të prishë fizikisht biofilmin dhe të heqë pjesën më të madhe të biobarrës, por përgjigja imune e strehuesit mund të jetë joefektive kundër biofilmit të mbetur, veçanërisht nëse përgjigja imune e strehuesit është kompromentuar. Kështu, terapitë antimikrobike, siç janë fashat me argjend, mund të mbështesin përgjigjen imune të strehuesit dhe të eliminojnë infeksionet e biofilmit. Përbërja, përqendrimi, tretshmëria dhe substrati i shpërndarjes mund të ndikojnë në efektivitetin antimikrobik të argjendit. Në vitet e fundit, përparimet në teknologjinë e përpunimit të argjendit i kanë bërë këto fasha më efektive9,23. Ndërsa teknologjia e fashave me argjend përparon, është e rëndësishme të kuptohet efektiviteti i këtyre fashave në kontrollin e infeksionit të plagës dhe, më e rëndësishmja, ndikimi i këtyre formave të fuqishme të argjendit në mjedisin dhe shërimin e plagës.
Në këtë studim, ne krahasuam efektivitetin e dy fashave të përparuara të argjendit me fashat konvencionale të argjendit që prodhojnë jone Ag1+ kundër biofilmeve duke përdorur modele të ndryshme in vitro dhe in vivo. Ne gjithashtu vlerësuam efektin e këtyre fashave në mjedisin e plagës dhe shërimin e pavarur nga infeksioni. Për të minimizuar ndikimin e matricës së administrimit, të gjitha fashat e argjendit të testuara përbëheshin nga karboksimetilcelulozë.
Vlerësimi ynë paraprak i këtyre veshjeve me argjend kundër biofilmeve koloniale të Pseudomonas aeruginosa dhe Staphylococcus aureus tregon se, ndryshe nga veshjet tradicionale Ag1+, dy veshje të përparuara me argjend, Ag1+ + EDTA/BC dhe kripërat e oksigjenuara të Ag, janë efektive në 5. Duke vrarë në mënyrë efektive bakteret e biofilmit brenda pak ditësh. Përveç kësaj, këto veshje parandalojnë riformimin e biofilmit pas ekspozimit të përsëritur ndaj baktereve planktonike. Veshje Ag1+ përmbante klorur argjendi, të njëjtin përbërës argjendi dhe matricë bazë si Ag1+ + EDTA/BC, dhe kishte një efekt të kufizuar në qëndrueshmërinë bakteriale brenda biofilmit gjatë së njëjtës periudhë. Vëzhgimi se një veshje Ag1+ + EDTA/BC ishte më efektive kundër biofilmit sesa një veshje Ag1+ që përbëhej nga e njëjta matricë dhe një përbërës argjendi mbështet idenë se kërkohen përbërës shtesë për të rritur efektivitetin e klorurit të argjendit kundër biofilmit, siç është raportuar diku tjetër15. Këto rezultate mbështesin idenë se BC dhe EDTA luajnë një rol shtesë duke kontribuar në efektivitetin e përgjithshëm të veshjes dhe se mungesa e këtij komponenti në veshjet Ag1+ mund të ketë kontribuar në dështimin për të demonstruar efikasitet in vitro. Ne zbuluam se veshjet e oksigjenuara me kripë Ag që prodhonin jone Ag2+ dhe Ag3+ shfaqën efikasitet më të fortë antibakterial sesa Ag1+ dhe në nivele të ngjashme me Ag1+ + EDTA/BC. Megjithatë, për shkak të potencialit të lartë redoks, është e paqartë se sa kohë jonet Ag3+ mbeten aktive dhe efektive kundër biofilmeve të plagëve dhe për këtë arsye meritojnë studime të mëtejshme. Përveç kësaj, ka shumë veshje të ndryshme që gjenerojnë jone Ag1+ që nuk u testuan në këtë studim. Këto veshje përbëhen nga komponime të ndryshme argjendi, përqendrime dhe matrica bazë, të cilat mund të ndikojnë në shpërndarjen e joneve Ag1+ dhe efektivitetin e tyre kundër biofilmeve. Vlen gjithashtu të përmendet se ka shumë modele të ndryshme in vitro dhe in vivo të përdorura për të vlerësuar efektivitetin e veshjeve të plagëve kundër biofilmeve. Lloji i modelit të përdorur, si dhe përmbajtja e kripës dhe proteinave të mediave të përdorura në këto modele, do të ndikojnë në efektivitetin e veshjes. Në modelin tonë in vivo, ne e lejuam biofilmin të piqej in vitro dhe më pas e transferuam atë në sipërfaqen dermale të plagës. Përgjigja imune e miut pritës është relativisht efektive kundër baktereve planktonike të aplikuara në plagë, duke formuar kështu një biofilm ndërsa plaga shërohet. Shtimi i biofilmit të pjekur në një plagë kufizon efektivitetin e përgjigjes imune të pritësit ndaj formimit të biofilmit duke lejuar që biofilmi i pjekur të vendoset brenda plagës para se të fillojë shërimi. Kështu, modeli ynë na lejon të vlerësojmë efektivitetin e fashave antimikrobike në biofilmet e pjekura para se plagët të fillojnë të shërohen.
Gjithashtu zbuluam se përshtatja e fashës ndikoi në efektivitetin e fashave të argjendit në biofilmat e rritur in vitro dhe lëkurën e derrit. Kontakti i ngushtë me plagën konsiderohet kritik për efektivitetin antimikrobik të fashës24,25. Fashat që përmbajnë kripëra të oksigjenuara të Ag ishin në kontakt të ngushtë me biofilmat e pjekur, duke rezultuar në një ulje të konsiderueshme të numrit të baktereve të qëndrueshme brenda biofilmit pas 24 orësh. Në të kundërt, kur trajtoheshin me fasha Ag1+ dhe Ag1+ + EDTA/BC, mbetën një numër i konsiderueshëm bakteresh të qëndrueshme. Këto fasha përmbajnë qepje përgjatë gjithë gjatësisë së fashës, të cilat krijojnë hapësira të vdekura që parandalojnë kontaktin e ngushtë me biofilmin. Në studimet tona in vitro, këto zona pa kontakt parandaluan vrasjen e baktereve të qëndrueshme brenda biofilmit. Ne vlerësuam qëndrueshmërinë bakteriale vetëm pas 24 orësh trajtimi; Me kalimin e kohës, ndërsa fasha bëhet më e ngopur, mund të ketë më pak hapësirë të vdekur, duke zvogëluar sipërfaqen për këto baktere të qëndrueshme. Megjithatë, kjo thekson rëndësinë e përbërjes së fashës, jo vetëm të llojit të argjendit në fashë.
Ndërsa studimet in vitro janë të dobishme për krahasimin e efektivitetit të teknologjive të ndryshme të argjendit, është gjithashtu e rëndësishme të kuptohen efektet e këtyre fashave në biofilma in vivo, ku indet pritëse dhe përgjigjet imune kontribuojnë në efektivitetin e fashave kundër biofilmave. Efekti i këtyre fashave në biofilmat e plagëve u vu re duke përdorur mikroskopinë elektronike skanuese dhe ngjyrosjen EPS të biofilmit duke përdorur ngjyra të ADN-së intraqelizore dhe jashtëqelizore. Ne zbuluam se pas 3 ditësh trajtimi, të gjitha fashat ishin efektive në reduktimin e ADN-së pa qeliza në plagët e infektuara me biofilm, por fasha Ag1+ ishte më pak efektive në plagët e infektuara me Staphylococcus aureus. Mikroskopia elektronike skanuese tregoi gjithashtu se ishin të pranishme dukshëm më pak baktere në plagët e trajtuara me fashat e argjendit, megjithëse kjo ishte më e theksuar me fashën me kripë Ag të oksigjenuar dhe fashën Ag1+ + EDTA/BC krahasuar me fashën Ag1+. Këto të dhëna tregojnë se fashat e argjendit të testuara kishin shkallë të ndryshme ndikimi në strukturën e biofilmit, por asnjë nga fashat e argjendit nuk ishte në gjendje të zhdukte biofilmin, duke mbështetur nevojën për një qasje holistike në trajtimin e infeksioneve të biofilmit të plagëve; përdorimi i shiritave të krahut prej argjendi. Trajtimi paraprihet nga debridimi fizik për të hequr pjesën më të madhe të biofilmit.
Plagët kronike shpesh janë në një gjendje inflamacioni të rëndë, me qeliza të tepërta inflamatore që mbeten në indin e plagës për një periudhë të zgjatur kohore, duke shkaktuar dëmtim të indeve dhe duke pakësuar oksigjenin e nevojshëm për metabolizmin dhe funksionin efikas qelizor në plagë26. Biofilmet e përkeqësojnë këtë mjedis armiqësor të plagës duke ndikuar negativisht në shërim në një sërë mënyrash, duke përfshirë frenimin e përhapjes dhe migrimit të qelizave dhe aktivizimin e citokinave proinflamatore27. Ndërsa fashat e argjendit bëhen më efektive, është e rëndësishme të kuptohet ndikimi që ato kanë në mjedisin dhe shërimin e plagës.
Është interesante se, megjithëse të gjitha fashat e argjendit ndikuan në përbërjen e biofilmit, vetëm fashat e kripës së argjendit të oksigjenuar rritën riepitelizimin e këtyre plagëve të infektuara. Këto të dhëna mbështesin gjetjet tona të mëparshme17 dhe ato të Kalan et al. (2017)28, të cilat demonstruan profile të mira sigurie dhe toksiciteti të kripërave të argjendit të oksigjenuar, pasi përqendrimet më të ulëta të argjendit ishin efektive kundër biofilmeve.
Studimi ynë aktual nxjerr në pah ndryshimet në teknologjinë e argjendit midis fashave antimikrobike të argjendit dhe ndikimin e kësaj teknologjie në mjedisin e plagës dhe shërimin e pavarur nga infeksioni. Megjithatë, këto rezultate ndryshojnë nga studimet e mëparshme që tregojnë se fasha Ag1+ + EDTA/BC përmirësoi parametrat e shërimit të veshëve të lepurit të lënduar in vivo. Megjithatë, kjo mund të jetë për shkak të ndryshimeve në modelet shtazore, kohët e matjes dhe metodat e aplikimit bakterial29. Në këtë rast, matjet e plagëve u morën 12 ditë pas lëndimit për të lejuar përbërësit aktivë të fashës të veprojnë në biofilm për një periudhë më të gjatë kohore. Kjo mbështetet nga një studim që tregoi se ulcerat e këmbëve të infektuara klinikisht të trajtuara me Ag1+ + EDTA/BC fillimisht u rritën në madhësi pas një jave trajtimi, dhe më pas gjatë 3 javëve të ardhshme të trajtimit me Ag1+ + EDTA/BC dhe brenda 4 javësh nga përdorimi i barnave jo-antimikrobike. Fashat CMC për të zvogëluar madhësinë e ulcerave30.
Disa forma dhe përqendrime të argjendit janë treguar më parë si citotoksike in vitro 11, por këto rezultate in vitro nuk përkthehen gjithmonë në efekte negative in vivo. Përveç kësaj, përparimet në teknologjinë e argjendit dhe një kuptim më i mirë i përbërjeve dhe përqendrimeve të argjendit në fasha kanë çuar në zhvillimin e shumë fashash të sigurta dhe efektive të argjendit. Megjithatë, ndërsa teknologjia e fashash me argjend përparon, është e rëndësishme të kuptohet ndikimi i këtyre fashash në mjedisin e plagës 31,32,33. Më parë është raportuar se shkalla e rritur e riepitelizimit korrespondon me një përqindje të rritur të makrofagëve M2 anti-inflamatorë krahasuar me fenotipin M1 pro-inflamator. Kjo u vu re në një model të mëparshëm të miut ku fasha plagësh me hidrogel argjendi u krahasuan me sulfadiazinë argjendi dhe hidrogele jo-antimikrobike 34.
Plagët kronike mund të shfaqin inflamacion të tepërt dhe është vërejtur se prania e neutrofileve të tepërta mund të jetë e dëmshme për shërimin e plagëve35. Në një studim tek minjtë me mungesë neutrofilesh, prania e neutrofileve vonoi riepitelizimin. Prania e neutrofileve të tepërta çon në nivele të larta të proteazave dhe specieve reaktive të oksigjenit, të tilla si superoksidi dhe peroksidi i hidrogjenit, të cilat shoqërohen me plagë kronike dhe me shërim të ngadaltë37,38. Po kështu, një rritje në numrin e makrofagëve, nëse nuk kontrollohet, mund të çojë në shërim të vonuar të plagëve39. Kjo rritje është veçanërisht e rëndësishme nëse makrofagët nuk janë në gjendje të kalojnë nga një fenotip pro-inflamator në një fenotip pro-shërues, duke rezultuar në plagë që nuk arrijnë të dalin nga faza inflamatore e shërimit40. Ne vumë re një ulje të neutrofileve dhe makrofagëve në plagët e infektuara me biofilm pas 3 ditësh trajtimi me të gjitha fashat me argjend, por ulja ishte më e theksuar me fashat me kripë të oksigjenuar. Kjo ulje mund të jetë një rezultat i drejtpërdrejtë i përgjigjes imune ndaj argjendit, një përgjigje ndaj uljes së ngarkesës biologjike, ose plaga në një fazë të mëvonshme të shërimit dhe për këtë arsye qelizat imune në plagë janë të reduktuara. Ulja e numrit të qelizave inflamatore në plagë mund të mbajë një mjedis të favorshëm për shërimin e plagëve. Mekanizmi i veprimit se si kripërat e oksidit të Ag nxisin shërimin e pavarur nga infeksioni është i paqartë, por aftësia e kripërave të oksidit të Ag për të prodhuar oksigjen dhe për të shkatërruar nivelet e dëmshme të peroksidit të hidrogjenit, një ndërmjetës i inflamacionit, mund ta shpjegojë këtë dhe kërkon studime të mëtejshme17.
Plagët e infektuara kronike që nuk shërohen përbëjnë një problem si për mjekët ashtu edhe për pacientët. Edhe pse shumë fasha pretendojnë efektivitet antimikrobik, hulumtimi rrallë përqendrohet në faktorë të tjerë kyç që ndikojnë në mikroambientin e plagës. Ky studim tregon se teknologjitë e ndryshme të argjendit kanë efikasitet të ndryshëm antimikrobik dhe, më e rëndësishmja, efekte të ndryshme në mjedisin e plagës dhe shërimin, pavarësisht nga infeksioni. Edhe pse këto studime in vitro dhe in vivo tregojnë efektivitetin e këtyre fashave në trajtimin e infeksioneve të plagëve dhe nxitjen e shërimit, nevojiten prova të kontrolluara të rastësishme për të vlerësuar efektivitetin e këtyre fashave në klinikë.
Setet e të dhënave të përdorura dhe/ose të analizuara gjatë studimit aktual janë të disponueshme nga autori përkatës me kërkesë të arsyeshme.
Koha e postimit: 15 korrik 2024